做研發(fā)時(shí), 我在生物公司認(rèn)識(shí)了老張, 他比我大兩歲, 博士畢業(yè)后就置身免疫檢測(cè)領(lǐng)域, 至今快十年了。周末, 我們常約著喝杯咖啡, 聊聊行業(yè)之事。老張說(shuō)話直, 做事踏實(shí), 然而在實(shí)驗(yàn)室里他吃過(guò)不少虧, 特別是跟ELISA試劑盒打交道的那幾年, 滿是辛酸淚。
就在去年的那個(gè)夏天, 老張承接了一項(xiàng)全新的課題, 此課題的任務(wù)是去開(kāi)展針對(duì)一批稀有樣本里特定的某種細(xì)胞因子濃度的檢測(cè)工作, 樣本的總量不算多, 然而每一份都是得來(lái)極為不易的, 屬于是從合作醫(yī)院那里費(fèi)盡周折好不容易才收集起來(lái)的, 老張?jiān)诋?dāng)時(shí)那可是信心十足的樣子, 覺(jué)著手上已經(jīng)使用了將近半年時(shí)間的科研ELISA試劑盒理應(yīng)是能夠滿足需求的, 畢竟在先前已經(jīng)做過(guò)幾十次實(shí)驗(yàn)了, 可都未曾出現(xiàn)過(guò)什么大的差錯(cuò)。
進(jìn)行實(shí)驗(yàn)直至第三天, 結(jié)果卻令人目瞪口呆。標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2值無(wú)論如何都無(wú)法提升至0.99以上, 重復(fù)孔的CV值竟高達(dá)百分之十五, 大大超出正常范圍。老張起初認(rèn)為是操作出現(xiàn)失誤, 反復(fù)進(jìn)行復(fù)測(cè)達(dá)三遍, 然而數(shù)據(jù)依舊糟糕透頂。他坐在實(shí)驗(yàn)臺(tái)前, 凝視著那排微孔板, 臉色變得極為難看。
在那段日子里, 老張近乎每日都沉浸于實(shí)驗(yàn)室之中, 從對(duì)樣本進(jìn)行前期處理開(kāi)始, 直至洗板的環(huán)節(jié), 每一個(gè)步驟他都再度予以檢查, 甚至連移液槍都找他人重新校準(zhǔn)了一回。然而那般問(wèn)題卻依舊持續(xù)存在著。他遂即開(kāi)始猜疑, 是不是試劑盒本身就出現(xiàn)了狀況, 可是他又不舍得直接將其更換掉,畢竟這一批試劑盒乃是上個(gè)月才采購(gòu)回來(lái)的, 其價(jià)格并非便宜啊。
轉(zhuǎn)折發(fā)生在一回行業(yè)交流會(huì)上, 老張跟一名從事蛋白檢測(cè)的同行交談起來(lái), 對(duì)方聽(tīng)了他的講述后, 微微一笑說(shuō)道, 你那個(gè)樣品基質(zhì)跟你所使用的試劑盒緩沖液體系也許并不匹配, 科研 ELISA 試劑盒雖說(shuō)通用性較強(qiáng), 可是不同廠家對(duì)于樣品基質(zhì)的耐受程度差別十分大, 你倒不如嘗試去找那種專門針對(duì)復(fù)雜樣本而優(yōu)化的試劑盒。
老張那時(shí)處于半信半疑的狀態(tài), 然而實(shí)在不存在別的辦法, 于是依照對(duì)方所推薦的渠道, 重新訂購(gòu)了一批全新的科研ELISA試劑盒。這一回他變得機(jī)靈了, 先是向廠家索要了技術(shù)支撐文檔, 仔仔細(xì)細(xì)地查看了緩沖液成分以及樣本稀釋建議, 還特意打了電話跟技術(shù)員確認(rèn)自身的樣本類型是否適用。
在2025年8月, 于新試劑盒到貨的那個(gè)日子, 老張?zhí)匾庠趯?shí)驗(yàn)記錄本上記錄下了日期。他將舊試劑盒的所有剩余批次都進(jìn)行了封存, 隨后采用新盒子再次跑了一遍標(biāo)準(zhǔn)曲線。其結(jié)果出乎他的預(yù)料, 那就是同樣一批樣本, 在相同的操作流程之下, R2值直接達(dá)到了0.994, 重復(fù)孔的CV值降到了百分之五以內(nèi)。他當(dāng)場(chǎng)就給我打了電話, 聲音之中帶著難以掩飾的興奮說(shuō)道: “兄弟, 這回找對(duì)東西了！”。
但是老張所擁有的運(yùn)氣并非是那般良好的。全新的試劑盒投入使用歷經(jīng)兩周時(shí)間, 之后再度呈現(xiàn)出異常的狀況。此次并不是標(biāo)準(zhǔn)曲線方面存在問(wèn)題, 而是檢測(cè)信號(hào)在整體上表現(xiàn)為偏弱的態(tài)勢(shì), 與預(yù)期所設(shè)定的數(shù)值相差了相當(dāng)大的一段距離。這一回老張并未急切地去懷疑試劑盒, 反而是率先對(duì)樣本的保存條件展開(kāi)了檢查。一經(jīng)檢查才得以知曉, 那一批樣本在冰箱當(dāng)中放置的時(shí)長(zhǎng)過(guò)于長(zhǎng)久, 經(jīng)歷了三次反復(fù)的凍融過(guò)程, 蛋白質(zhì)早就降解到幾乎所剩無(wú)幾的程度了。
得知這個(gè)教訓(xùn)后, 老張徹頭徹尾真正地明白了, 科研ELISA試劑盒自身僅僅只是工具而已, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果能否良好達(dá)標(biāo), 樣本質(zhì)量、操作規(guī)范以及試劑盒的適配性這幾個(gè)方面全都不可缺少, 缺一不可。自此, 他著手開(kāi)始養(yǎng)成了一個(gè)習(xí)慣, 每次在做實(shí)驗(yàn)之前, 都會(huì)先將樣本的處理流程清清楚楚地寫出來(lái), 并且標(biāo)注好凍融的次數(shù)以及保存的時(shí)間。與此同時(shí), 他還著手開(kāi)始進(jìn)行有關(guān)試劑盒的批間驗(yàn)證工作, 對(duì)于同一個(gè)型號(hào)的試劑盒, 會(huì)預(yù)先提前測(cè)試兩個(gè)批號(hào), 以此來(lái)確認(rèn)批次的穩(wěn)定性。
今年年初的時(shí)候, 老張于一家第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)擔(dān)任顧問(wèn), 承接了一個(gè)大客戶所下的訂單, 該訂單要求檢測(cè)一百多份臨床樣本之中的一種炎癥因子。這批樣本的基質(zhì)具備復(fù)雜性, 其中一部分是血清, 一部分是血漿, 另外一部分是細(xì)胞培養(yǎng)上清。老張徑直采用了去年的那套選型思路, 預(yù)先向三四個(gè)廠家索要了試用裝, 并使用實(shí)際樣本開(kāi)展了預(yù)實(shí)驗(yàn), 最終選定了一款緩沖液兼容性最為優(yōu)良的科研 ELISA 試劑盒。
從事完整個(gè)項(xiàng)目的工作之后, 僅有兩個(gè)樣本由于發(fā)生溶血現(xiàn)象而被排除掉, 除此之外的所有樣本均成功通過(guò)質(zhì)量控制。在客戶那一端, 他們表現(xiàn)出了對(duì)該狀況極為喜悅之感滿意之情, 并且還特意發(fā)送電子郵件對(duì)老張他們的團(tuán)隊(duì)在數(shù)據(jù)精確性方面給予了稱贊表?yè)P(yáng)。后來(lái)老張同我講了這樣一番內(nèi)容: “挑選試劑盒的這個(gè)行為, 就如同挑選工具狀況一樣, 絕不能夠僅僅去查看價(jià)格以及品牌這些方面, 而必須要去考量它是否契合你手中所開(kāi)展的工作。要是樣品的基質(zhì)情形比較復(fù)雜, 那么就需要去尋覓緩沖液性能良好的那種試劑盒；要是樣本顯得非常珍貴難得, 那么就理所應(yīng)該去尋覓靈敏程度比較高的那種試劑盒?！?。
把實(shí)話說(shuō)出來(lái), 聽(tīng)老張?jiān)V說(shuō)這些經(jīng)歷, 我內(nèi)心的感觸相當(dāng)深刻。從事科研ELISA實(shí)驗(yàn)的人士, 哪一個(gè)沒(méi)有被試劑盒給坑過(guò)呢? 存在這樣的情況, 有的跑出來(lái)的數(shù)據(jù)沒(méi)辦法使用, 有的重復(fù)性太差程度到令人崩潰, 有的試劑盒批次之間的差異大到難以置信。這些問(wèn)題, 許多都并非是操作方面的問(wèn)題, 而是試劑盒選型沒(méi)有選對(duì)正確的方向。
老張如今在自己手中常常準(zhǔn)備著處于三四個(gè)不同廠家的科研方面的ELISA試劑盒東西, 依據(jù)用途類別來(lái)進(jìn)行使用, 用于高靈敏度檢測(cè)的是采用A牌, 針對(duì)復(fù)雜基質(zhì)樣本的便使用B牌, 常規(guī)篩選所選用的則是C牌, 在每次實(shí)施采購(gòu)這項(xiàng)行為之前, 他都會(huì)向廠家提出要求, 讓廠家務(wù)必要提供十分詳細(xì)的有關(guān)于交叉反應(yīng)的數(shù)據(jù)以及樣本基質(zhì)驗(yàn)證的報(bào)告, 他說(shuō)道, 花費(fèi)比較多的時(shí)間去做選型這一舉措, 相比于回過(guò)頭來(lái)補(bǔ)充數(shù)據(jù)而言是要?jiǎng)澦阍S多的。
上周, 我前往老張的實(shí)驗(yàn)室找尋他, 恰好碰到他正在為新來(lái)的研究生開(kāi)展培訓(xùn), 他手持一盒全新的科研ELISA試劑盒, 指著包裝上面的參數(shù)講道, “你們不要認(rèn)為這個(gè)板子小, 其實(shí)每一步都同最終結(jié)果的可靠性存在關(guān)聯(lián), 選準(zhǔn)試劑盒, 實(shí)驗(yàn)便成功了一半”, 那個(gè)研究生聽(tīng)得十分認(rèn)真, 記錄了滿滿兩頁(yè)筆記。
瞅瞅老張如今這般應(yīng)對(duì)自如的狀態(tài), 再回想他往昔被實(shí)驗(yàn)試劑盒搞得狼狽不堪的情形, 我認(rèn)為他那兩年所走的曲折道路是有價(jià)值的。緣由在于他所經(jīng)歷的挫折, 往后都化作了經(jīng)驗(yàn), 并且他歸納出來(lái)的選型辦法, 當(dāng)下成了他們實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)流程?？蒲蠩LISA試劑盒這類物品, 使用得當(dāng)便是得力工具, 用錯(cuò)了便成了深不見(jiàn)底的窟窿。期望每一個(gè)從事ELISA工作的人, 都能夠盡早尋覓到契合自身的那一款。
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