為什么我要寫這篇文章
上周, 老張給我打了電話, 其聲音之中盡是疲憊。他講自己持續(xù)加班達(dá)一個(gè)月, 然而因試劑盒選被錯(cuò), 致使整個(gè)項(xiàng)目的數(shù)據(jù)通通作廢作罷。掛斷電話之后, 我決意將我與他的經(jīng)歷撰寫下來(lái), 期望能夠讓更多從事科研工作的朋友較少地走上彎路出錯(cuò)。
老張的課題組到底出了什么問題
我有個(gè)師兄老張, 是我以前在研究所讀博之際結(jié)識(shí)的, 足足比我大三屆, 如今呢, 在省農(nóng)科院任免疫檢測(cè)方向的課題組長(zhǎng)這個(gè)職位。去年將要結(jié)束之時(shí), 當(dāng)時(shí)他們那個(gè)團(tuán)隊(duì)接受了一項(xiàng)由省里重點(diǎn)立項(xiàng)的課題, 是針對(duì)某種新型植物病毒在田間的傳播規(guī)律方面進(jìn)行研究的。
老張當(dāng)初是怎么選的ELISA試劑盒
3月初的時(shí)候, 老張帶著兩個(gè)碩士生開啟了實(shí)驗(yàn), 由于項(xiàng)目時(shí)間緊迫, 他沒有進(jìn)行仔細(xì)比對(duì), 就直接從合作了三年的供應(yīng)商那里購(gòu)買了一盒常規(guī)的雙抗體夾心ELISA試劑盒, 當(dāng)時(shí)他還跟我說(shuō), 那個(gè)是老牌子, 已經(jīng)用了五年, 不會(huì)出現(xiàn)問題。
第一次發(fā)現(xiàn)不對(duì)勁
4月15日那天, 老張向我發(fā)送了條微信, 內(nèi)容是, “兄弟, 我這兒的數(shù)據(jù)存在些怪異之處之處, 具體表現(xiàn)為, 空白孔的吸光度相較于陽(yáng)性對(duì)照而言還要高?！蔽以儐査褂玫南♂屢菏鞘裁? 他的回答是試劑盒所自帶的那種。當(dāng)時(shí)我就向他作出了提醒, 某些價(jià)格較低的試劑盒所配備的稀釋液有可能產(chǎn)生非特異性反應(yīng)這種情況。
問題越來(lái)越嚴(yán)重
4月底時(shí), 老張的實(shí)驗(yàn)室已然浪費(fèi)了將近200份田間樣本, 他們做了重復(fù)三次的操作, 然而每次得出的結(jié)果都存在差異,其中最離譜的一回, 同一個(gè)樣本的OD值從0.8跳躍到了2.1至此, 老張開始對(duì)試劑盒批間差過大產(chǎn)生懷疑。
為什么ELISA試劑盒選不對(duì)就全白費(fèi)
遭遇并非個(gè)例的老張；我于生物試劑行業(yè)從事六年技術(shù)支撐工作, 這樣類似的案例見識(shí)過許多；ELISA試劑盒是一個(gè)對(duì)穩(wěn)定性極度依賴的實(shí)驗(yàn)體系, 偏差在任何一個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)傳導(dǎo)至最終數(shù)據(jù)。
靈敏度不夠會(huì)怎樣
老張所檢測(cè)的那種病毒, 在植物體內(nèi)的含量是很低的, 常規(guī)試劑盒的檢測(cè)限大概在每毫升500皮克左右, 然而目標(biāo)病毒的濃度常常僅僅只有300皮克。這就仿佛是使用網(wǎng)眼過大的漁網(wǎng)去打撈小魚, 撈上來(lái)的全都是一些漏網(wǎng)的呀。
特異性差后果更嚴(yán)重
在剛進(jìn)入5月的時(shí)候, 老張更換了一款宣稱具有高特異性的試劑盒。然而, 其交叉反應(yīng)率竟然高達(dá)15%, 將另外一種并無(wú)危害的植物蛋白識(shí)別成了呈陽(yáng)性的狀態(tài)。課題組當(dāng)中的兩個(gè)碩士生, 為了對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行校對(duì), 在連續(xù)兩周的時(shí)間里, 每天都工作到凌晨?jī)牲c(diǎn)。
穩(wěn)定性是命門
有個(gè)老張, 最后去查了試劑盒的批號(hào), 他發(fā)現(xiàn)那件東西那批次的生產(chǎn)日期是去年8月份, 此日期已接近說(shuō)明書上邊標(biāo)注的保質(zhì)期終點(diǎn)。后來(lái)他跟我講: “早知道的話, 就應(yīng)當(dāng)先去做一次批間差驗(yàn)證, 現(xiàn)在想來(lái), 是自己大意了?！薄?/p>
老張到底怎么找到的出路
5月中旬的時(shí)候, 老張完全地摒棄了原本的方案, 他叫我去協(xié)助聯(lián)系國(guó)內(nèi)幾家專門從事ELISA試劑盒制作的廠家, 我舉薦了深圳一家在植物病毒檢測(cè)范疇有著十年經(jīng)歷的公司。
老張做了三步關(guān)鍵選擇
第一步, 他將目標(biāo)病毒的保守序列發(fā)送給我, 我協(xié)助其證實(shí)了試劑盒內(nèi)的包被抗體是否針對(duì)此序列。第二步, 他索要了三個(gè)不同批次的試劑盒, 自行開展了一回批間差對(duì)比實(shí)驗(yàn)。第三步, 他特地要求采用自家實(shí)驗(yàn)室的PBST稀釋液, 而非試劑盒所附帶的。
數(shù)據(jù)終于穩(wěn)住了
5月28這一日, 老張給我發(fā)過來(lái)截圖圖片, 新的試劑盒其批間變異系數(shù)下降到了5%范圍以內(nèi), 空白孔的OD值穩(wěn)穩(wěn)地處在0.05這個(gè)數(shù)值左右, 他講說(shuō), 終于能夠睡上一個(gè)安穩(wěn)覺睡眠了, 6月初的時(shí)候, 他們這個(gè)團(tuán)隊(duì)?wèi){借新試劑盒再次檢測(cè)了先前留下剩余的80份樣本, 此次的結(jié)果呈現(xiàn)出高度的一致狀態(tài)。
選ELISA試劑盒到底應(yīng)該看哪些指標(biāo)
要是你同樣正因挑選試劑盒而犯愁的情況下, 記好老張所經(jīng)歷過的那些坑。其一, 別單單去瞅品牌, 得瞧瞧檢測(cè)限以及定量范圍是不是跟你的目標(biāo)物相契合。其二, 交叉反應(yīng)率絕對(duì)必須得低于1%才可以, 尤其是在進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)這個(gè)時(shí)候。最后呀, 買回來(lái)之后要先去做三件事情: 對(duì)稀釋液進(jìn)行適用性測(cè)試, 對(duì)批間差開展驗(yàn)證, 進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。
哪里能找到靠譜的ELISA試劑盒
老張過后跟我講, 他如今挑選試劑盒光是留意兩點(diǎn), 其一呢是廠家有無(wú)給出完備的質(zhì)控報(bào)告, 其二是可不可以給出免費(fèi)試用裝。他當(dāng)下合作的這家位于深圳的公司, 每一個(gè)批次都附帶SDS - PAGE以及Western blot的抗體驗(yàn)證圖譜, 這在行業(yè)范圍之內(nèi)已然算是極為規(guī)范的了。
老張現(xiàn)在怎么樣了
上周六, 我們進(jìn)行視頻聊天, 老張身處實(shí)驗(yàn)室, 一邊著手整理數(shù)據(jù), 一邊臉上浮現(xiàn)笑容。他講課題進(jìn)展順利有加, 兩名碩士生已然學(xué)會(huì)鑒別試劑盒好壞的方法。與此同時(shí), 他還將新試劑盒的廠家信息發(fā)送至課題組的群里, 以便讓其他老師當(dāng)作參考。我明了, 過去這半年的時(shí)段對(duì)他來(lái)講太過珍視, 不過起碼當(dāng)下, 他終于無(wú)需再為試劑盒的問題而發(fā)愁了。
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