寫在前面：這篇文章能幫你省多少錢
要是你正在為實(shí)驗(yàn)室采購熒光定量PCR試劑盒而犯愁, 或者被各種各樣的品牌參數(shù)弄得暈頭轉(zhuǎn)向, 那我朋友老劉的經(jīng)歷說不定能給你些許啟迪。老劉已從事分子檢測(cè)三年時(shí)間了, 他所踩過的坑以及花過的冤枉錢, 現(xiàn)在都樂意拿出來進(jìn)行分享。
我認(rèn)識(shí)的這個(gè)朋友
當(dāng)時(shí), 我于行業(yè)交流會(huì)上結(jié)識(shí)了老劉, 起初, 他方才開始管理操持一家第三方檢測(cè)公司的分子平臺(tái), 此平臺(tái)的主要職責(zé)在于針對(duì)食品致病菌以及轉(zhuǎn)基因成分展開熒光定量PCR檢測(cè)工作。同時(shí)需要留意的是他所學(xué)專業(yè)為生物技術(shù), 然而先前卻一直從事常規(guī)理化檢測(cè)方面的工作, 對(duì)于分子領(lǐng)域相應(yīng)業(yè)務(wù)而言, 可以說是半路方才投身進(jìn)來的。公司老板為他配備了一臺(tái)全新的熒光定量PCR儀, 不過試劑盒采購這一事情全部都落在了他這單獨(dú)一個(gè)人的肩頭上邊。
第一次采購：只看價(jià)格吃了大虧
2024年3月, 老劉才剛上任沒好多天, 公司采購經(jīng)理便催他去下單試劑盒?！澳汶S意挑個(gè)價(jià)錢不貴的吧, 預(yù)算受限?！崩蟿⑺剂恐鴥r(jià)格低廉的估計(jì)也能夠使用, 于是挑選了一款單價(jià)處于最下限的熒光 定量PCR試劑盒, 每一盒足夠做200個(gè)反應(yīng), 僅僅才兩千出頭。然而第一批樣品做完之后, 他察覺到問題相當(dāng)嚴(yán)重了: 擴(kuò)增曲線老是會(huì)出現(xiàn)并非特異性的峰, 熔解曲線亦不純凈, 好幾個(gè)內(nèi)標(biāo)都沒有出現(xiàn)結(jié)果有數(shù)據(jù)趨勢(shì)的情況。
排查過程折騰了整整一周
那個(gè)叫老劉的人, 最開始的時(shí)候, 竟認(rèn)為是自身去進(jìn)行的操作方面存在問題, 所以就再三地去調(diào)整加樣的量, 又對(duì)退火的溫度加以調(diào)整, 甚至還更換了所使用的耗材的品牌。他還特意去撥打了電話, 向熒光定量PCR儀器廠家的技術(shù)支撐詢問情況, 對(duì)方聲稱儀器不存在任何問題。最后, 他將懷疑的眼光鎖定在了試劑盒上, 使用了一款是實(shí)驗(yàn)室先前剩余下來的另外一個(gè)品牌的試劑盒去做對(duì)比, 結(jié)果呢, 針對(duì)同樣的樣本, 老試劑盒跑出來的數(shù)據(jù)顯得特別漂亮。這下老劉算是全都明白了, 得出便宜的東西就不會(huì)有好貨這樣的結(jié)論。
供應(yīng)商選不好，后續(xù)全是坑
低價(jià)試劑盒的那家供應(yīng)商是個(gè)小代理商, 老劉打電話去投訴, 對(duì)方先說可能是你操作不當(dāng), 之后又講這批貨存在點(diǎn)批次差異, 最后干脆不接電話了。老劉氣得厲害, 不僅浪費(fèi)了公司兩千多塊, 還耽擱了客戶送檢的樣品周期, 被老板狠狠批了一頓。他對(duì)我說選熒光定量PCR試劑盒的時(shí)候, 供應(yīng)商的售后支持著實(shí)太重要了, 不然出了問題你連個(gè)能問的人都找不到。
第二次選擇：看參數(shù)也未必靠譜
吸取了那次的教訓(xùn)之后, 老劉在這一回開始認(rèn)認(rèn)真真去看產(chǎn)品說明書了。他針對(duì)每家的靈敏度、特異性、重復(fù)性數(shù)據(jù)展開了研究, 并且還特地挑選了一款標(biāo)明“檢測(cè)限低至10拷貝”的熒光定量PCR試劑盒。在2024年6月的時(shí)候, 他滿懷信心地開展了第一批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。然而結(jié)果卻又一次讓現(xiàn)實(shí)給了他沉重打擊: 低濃度的陽性樣本的確是能夠被檢測(cè)出來的, 可是CT值的波動(dòng)特別大, 同一份樣本連續(xù)測(cè)三次, CT值的標(biāo)準(zhǔn)差超出了1.5。就熒光定量PCR而言, 這樣的重復(fù)性情形根本沒辦法被應(yīng)用于正式的檢測(cè)報(bào)告當(dāng)中。
同行推薦讓他找到了方向
正值老劉快要放棄之際, 一位于疾控中心工作的師兄向他推薦了一款試劑盒, 師兄說道: “你務(wù)必要留意看試劑盒之緩沖液配方以及熱啟動(dòng)酶質(zhì)量, 這些方才是決定穩(wěn)定性的關(guān)鍵所在?！?師兄還告知他, 諸多價(jià)格低廉的熒光定量PCR試劑盒, 為降低成本, 所采用的熱啟動(dòng)酶雜質(zhì)眾多, 以至于引發(fā)反應(yīng)體系不穩(wěn)定。老劉依照師兄給出的建議, 選擇了那款試劑盒。
試用后的驚喜
2024年8月初的時(shí)候, 老劉拿到了新的熒光定量PCR試劑盒樣品, 他做了十組不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品, 并且每組都含有三個(gè)重復(fù), 結(jié)果讓他感到非常滿意, 其檢測(cè)限能夠達(dá)到5拷貝, CT值標(biāo)準(zhǔn)差全都在0.3以內(nèi), 擴(kuò)增曲線光滑且整齊, 內(nèi)標(biāo)全部正常起線, 最為關(guān)鍵的是, 這款試劑盒針對(duì)不同的樣本基質(zhì), 諸如食用油、奶粉、調(diào)味料等, 都能夠穩(wěn)定地得出結(jié)果, 不需要額外去做基質(zhì)優(yōu)化。
踩坑后總結(jié)出來的選型要點(diǎn)
對(duì)于熒光定量PCR試劑盒的挑選, 老劉如今已然頗具心得, 他向我講述了幾個(gè)關(guān)鍵要點(diǎn), 這些要點(diǎn)是:
看熱啟動(dòng)酶的質(zhì)量
這是對(duì)試劑盒穩(wěn)定性起著決定作用的核心部件, 具備良好性能的熱啟動(dòng)酶在室溫狀況下不會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象, 當(dāng)溫度升高之后能夠迅速被激活, 以此確保反應(yīng)所具有的特異性以及靈敏度屬性, 你能夠向供應(yīng)商索要一份關(guān)于酶的性能參數(shù)資料, 或者讓他們給予不同酶之間的對(duì)比數(shù)據(jù)。
注意緩沖液配方
切莫僅盯著pH值瞧, 還得瞅里面有無經(jīng)優(yōu)化的鹽離子濃度, 以及穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑。部分試劑盒雖說標(biāo)明了通用的緩沖液, 然而對(duì)于復(fù)雜樣本的耐受性糟糕透頂。你能去詢問供應(yīng)商, 此試劑盒有無通過大體積樣本或者高鹽樣本的測(cè)試。
先試用再采購
老劉有著這樣的經(jīng)驗(yàn), 即任何一款熒光定量PCR試劑盒, 都得先去申請(qǐng)?jiān)囉醚b, 并且要用自身實(shí)驗(yàn)室的儀器以及實(shí)際的樣本去做驗(yàn)證, 不要僅僅去看說明書上面的數(shù)據(jù), 因?yàn)槟鞘莿e人處于理想條件之下跑出來的, 你得運(yùn)用你自己的檢測(cè)環(huán)境、你的樣本類型來進(jìn)行驗(yàn)證, 如此才能夠判斷是不是適合你。
考察供應(yīng)商的技術(shù)支撐能力
挑選供應(yīng)商之際, 你得問明白他們有沒有提供上門培訓(xùn), 有沒有專職的分子生物學(xué)技術(shù)支撐, 響應(yīng)時(shí)間究竟是多久。某些大品牌的代理商雖說價(jià)格稍高些, 不過技術(shù)支撐頗為專業(yè), 碰到問題能夠迅速給出解決方案。老劉當(dāng)下寧愿貴一點(diǎn), 也要去選口碑佳、技術(shù)過硬的供應(yīng)商。
他現(xiàn)在的工作狀態(tài)
現(xiàn)在, 老劉的分子平臺(tái), 已經(jīng)穩(wěn)定運(yùn)行了, 快一年的時(shí)間了, 每月檢測(cè)樣品量, 從最初的200份, 增加到800份以上了, 他所用的那款熒光定量PCR試劑盒, 一直很穩(wěn)定, 老板對(duì)他的工作, 也越來越認(rèn)可了, 去年年底, 公司還給他配了一個(gè)助理, 老劉說, 選對(duì)試劑盒, 不只是省了錢, 更重要的是, 贏得了客戶的信任, 和老板的肯定。
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