科研ELISA試劑盒，到底怎么選才不踩坑
那些從事科研工作的朋友都清楚, 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精確程度會直接對論文的走向起到?jīng)Q定性作用。去年年末的時候, 我有一位在生物公司搞研發(fā)的朋友老張, 他就險些由于試劑盒方面出現(xiàn)的問題, 而致使整個項(xiàng)目遭受失敗的結(jié)局。
老張于杭州一家從事免疫診斷的公司工作了五年 , 其主要職責(zé)是專注于細(xì)胞因子的檢測工作。他這人在做事方面較為靠譜 , 然而卻存在一個毛病 , 那便是總是傾向于在試劑盒上節(jié)省開支。他認(rèn)為不論怎樣都是針對性檢測同一個指標(biāo) , 國產(chǎn)的試劑盒價格更為便宜 , 所以能夠節(jié)省的話就盡量節(jié)省一些經(jīng)費(fèi)。最終 , 這樣的想法致使他遭受了巨大的損失。
買了便宜試劑盒，數(shù)據(jù)全廢了
過去的去年那個九月月份之時, 老張接收到了一個涉及TNF-α于炎癥這樣的反應(yīng)其中調(diào)控機(jī)制方式的項(xiàng)目。此項(xiàng)目時間緊湊緊迫, 任務(wù)繁重沉重, 他為了趕往前推進(jìn)進(jìn)度, 從某家并非太過于知名有名的較為小的廠子工廠采購了一批用于科研方面的ELISA試劑盒, 其價格確實(shí)低廉便宜, 恰好就只是三百多塊錢一盒。
歷經(jīng)第一批樣本的操作完成, 所呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)看上去極為出色, 其發(fā)展趨勢同樣契合預(yù)先的期望。老張為此相當(dāng)開心, 感覺像是占到了很大的便宜。然而, 當(dāng)進(jìn)入到重復(fù)實(shí)驗(yàn)的階段時, 狀況出現(xiàn)了——仍是相同的樣本, 遵循一樣的操作流程, 最終結(jié)果卻相差了百分之三十還要更多。
重復(fù)三次數(shù)據(jù)對不上，導(dǎo)師怒了
老張起初覺得是操作有誤, 于是再次配置了標(biāo)準(zhǔn)品, 進(jìn)而調(diào)整了孵育時間, 并且將洗板的次數(shù), 從原本的三次提升到了五次。然而, 不管怎樣進(jìn)行調(diào)整, 數(shù)據(jù)一直都不穩(wěn)定, CV值也就是變異系數(shù), 始終處于百分之十五以上, 而正常的試劑盒應(yīng)當(dāng)控制在百分之五以內(nèi)呀。
這一回問題可嚴(yán)重了。他的導(dǎo)師, 也就是老周, 是個格外嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募一? 瞅見那些數(shù)據(jù)之后, 直接就猛地拍了桌子, 大聲質(zhì)問: “你所做的這到底是怎樣的一個實(shí)驗(yàn)? 這些數(shù)據(jù)如此雜亂無章, 究竟要怎樣去發(fā)表文章? 又該如何去申請專利? ”。
那時的老張呀, 心里急切得恨不能尋個能鉆進(jìn)去的地縫, 他鼓起勇氣, 硬著頭皮再一次展開排查, 最終經(jīng)過一番查找, 從中找到, 那些價格低廉的科研ELISA試劑盒里所包含的抗體效價存在極嚴(yán)重的不足狀況, 其表現(xiàn)為檢測靈敏度根本沒辦法去滿足實(shí)驗(yàn)所提出的要求。
換品牌重做，一個月全白干
毫無辦法, 老張唯有將先前一個月所作出的數(shù)據(jù)全部予以作廢, 而后重新去采購試劑盒。此次他變得機(jī)靈了, 特意尋覓了在行業(yè)內(nèi)部口碑良好的品牌, 像是R&D Systems以及Thermo Fisher的現(xiàn)貨產(chǎn)品。雖說其價格貴出了許多, 每一盒得要一千多, 可是好在具備穩(wěn)定性。
在重新開展實(shí)驗(yàn)的那段日子里, 老張差不多每天都待在實(shí)驗(yàn)室里頭。從對樣本進(jìn)行稀釋開始, 一直到繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 每一個步驟他都謹(jǐn)慎小心、全神貫注。還好在更換上了質(zhì)量可靠、令人放心的科研ELISA試劑盒之后, 所獲取的數(shù)據(jù)最終呈現(xiàn)出了穩(wěn)定的態(tài)勢。重復(fù)實(shí)施三次操作所得到的CV值均被控制在了百分之三以內(nèi), 而且標(biāo)準(zhǔn)曲線所對應(yīng)的R2值同樣也達(dá)到了0.999以上。
為什么試劑盒的選擇決定實(shí)驗(yàn)成敗
把事后老張對我講的話進(jìn)行復(fù)盤, 總結(jié)出了幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn), 他講, 科研ELISA試劑盒所重視的并非是價格, 而是批間一致性, 每一批大品牌的試劑盒在出廠之前都會開展規(guī)范嚴(yán)格的質(zhì)控, 以此來確認(rèn)不同批次的試劑盒探測結(jié)果的差異處于可承接的范圍之內(nèi), 然而小廠所生產(chǎn)的試劑盒, 或許連最基礎(chǔ)的抗體配對都未曾進(jìn)行充足的驗(yàn)證。
提及的另外一點(diǎn)乃是關(guān)于靈敏度的狀況。老張所進(jìn)行研究的TNF-α, 于細(xì)胞上清里其濃度處于極度低的水平, 僅有幾十皮克每毫升。價格較為低廉的試劑盒, 其檢測下限過高, 基本壓根無法檢測低濃度的標(biāo)本, 僅僅只能憑借誤差去“制造”試驗(yàn)數(shù)據(jù)。
看看這些坑，你踩過幾個
后來老張又講了相關(guān)情況, 他說他知曉不少同在從事相關(guān)工作的人搞這一套會出現(xiàn)類似失誤。有人選取的科研ELISA試劑盒, 在把標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行復(fù)溶之后剛一弄好就出現(xiàn)了沉淀, 這意味著蛋白已然發(fā)生變性的狀況了；還有人所測出的OD值, 也就是光密度值, 其中出現(xiàn)偏離常規(guī)數(shù)值的情況特別多, 在對板條沖洗的過程里才發(fā)現(xiàn)板條存在吸附能力并非良好的情形。
更為夸張的是, 有個師弟購置到的試劑盒, 其說明書之上所寫的檢測范圍是每毫升15.6至1000皮克, 然而在實(shí)際操作期間發(fā)覺, 于低濃度區(qū)域的標(biāo)準(zhǔn)曲線幾近是一條水平線, 根本沒辦法檢測出來。用這種試劑盒去發(fā)文章, 審稿人一眼就能瞧出問題。
怎么判斷試劑盒靠不靠譜
老張此刻挑選試劑盒, 存有自身的一套思路。首先得考量品牌過往經(jīng)歷以及市場的評議, 絕不僅僅注重價錢。其次需查驗(yàn)試劑盒有無第三方獨(dú)立所驗(yàn)證的數(shù)據(jù), 像是有沒有通過ISO13485認(rèn)證。反之還要索取免費(fèi)樣本進(jìn)行測試, 不要徑直大批量去采購。
他特意著重提示, 于購買科研ELISA試劑盒的情況之下, 需將保存條件以及有效期詢問明晰。存在一些小型廠家, 為了達(dá)成成本降低的目的, 會使抗原抗體長時間放置于不合適的那個溫度里, 實(shí)際上其活性早就下降到幾乎沒有多少的程度了。
現(xiàn)在的老張，已經(jīng)成了試劑盒選購專家
經(jīng)過那次教訓(xùn)之后, 老張如今在公司當(dāng)中變?yōu)榱嗽噭┖胁少彿矫娴摹鞍殃P(guān)人”。上個月的時候, 他才幫實(shí)驗(yàn)室挑選了一批用于檢測IL - 6以及IL - 8的科研ELISA試劑盒, 且全部選用的是經(jīng)過國際文獻(xiàn)驗(yàn)證的品牌。項(xiàng)目進(jìn)展極為順利, 第一批數(shù)據(jù)便獲得了導(dǎo)師的認(rèn)可。
他背著別人跟我講, 那一個月毫無收獲的付出雖說令人心疼, 然而換個方面去看待, 倒也算是件不錯的事。這可比在發(fā)表論文之前才察覺到問題要好太多了, 不然那才是實(shí)實(shí)在在丟盡臉面的情況呢。
倘若你同樣在進(jìn)行細(xì)胞因子、炎癥因子或者與之的相關(guān)蛋白的檢測, 記好老張所說的話: 科研ELISA試劑盒能夠節(jié)省費(fèi)用, 然而絕不該在質(zhì)量方面有所節(jié)省。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所具備的可靠性, 是任何一筆經(jīng)費(fèi)都沒辦法兌換回來的。
