是不是你正在進行的ELISA實驗, 老是碰到背景偏高、標曲跑不平、數(shù)據(jù)不堪入目的狀況? 別著急就認定試劑盒不行, 很有可能只是你尚未摸透它的性子。這篇文章所要講述的, 乃是我朋友老趙的實際經(jīng)歷。在一家市級生物研究所摸爬滾打了六年, 從剛開始被ELISA試劑盒折騰得快懷疑人生, 到后來成為所里公認的“ELISA高手”，他這一路走來踩過的坑、用過的巧妙辦法, 通通值得你仔細瞧一瞧。讀完它, 你起碼能少走一年的冤枉路。
當時, 老趙初入研究所之際, 負責的工作乃是細胞因子檢測方面的事務 , 每日清晨八點半抵達實驗室 , 首要之事便是自冰箱之內(nèi)取出科研ELISA試劑盒后 , 放置于室溫環(huán)境中使其達到平衡。他向我講述說道 , 那時的他尚覺得ELISA僅僅是個十分簡易的 ”加樣 - 孵育 - 洗板 - 顯色 “這樣的流程 , 壓根兒未曾料想到其中的門道竟然如此之復雜。他面帶苦笑地講道 , ”我入職后頭一個月 , 整整報廢了三塊板 , 以至于領導險些安排我轉(zhuǎn)崗去從事洗瓶子的工作?！?。
確實是在2023年9月, 出現(xiàn)了算得上真正的轉(zhuǎn)折點, 有個情況是, 那時老趙接到了一個省自然基金項目的樣本檢測任務, 這個項目周期緊迫, 樣本數(shù)量龐大, 具體是有幾百份血清樣本, 確切的數(shù)據(jù)是三百 多份, 他依照先前的老辦法來開展操作, 然而最后的結果是, 第一批數(shù)據(jù)被得出之際, 其中標曲的R2 值僅僅為0.85, 另外幾個復孔的CV值竟然高達百分之十八, 他眼睛直直地注視著電腦屏幕, 致使整個人出現(xiàn)腦子一片空白沒有意識的狀況。就在那天下午, 他把試劑盒說明書及其網(wǎng)上所有能夠?qū)ひ挼降腅LISA操作技巧, 全部都翻找了一遍。一直持續(xù)到凌晨兩點。
第二天清晨時分, 他做出決定要從起始之處開始排查問題, 他首先懷疑科研ELISA試劑盒自身存在著問題, 就此更換了一個全新批次的試劑盒重新去跑標曲。然而結果是標曲依舊呈現(xiàn)得不好看。他接著又懷疑是洗板機出現(xiàn)了問題, 采用手動洗板進行了一次嘗試, 卻發(fā)現(xiàn)背景值反倒變得更高了。到當下這個時候他是完全沒有了頭緒方向。老趙后來跟我講: “那個時候我真的是特別想要給試劑盒廠家打電話去罵人, 可是隨后冷靜思考以后, 人家產(chǎn)品是通過了質(zhì)檢的, 那問題肯定是出在我自己這兒了?！?。
經(jīng)過了整整一周的反復進行測試, 老趙最終是找到了癥結的所在之處。問題是出在了樣本稀釋液的pH值, 以及離子強度之上。他之前一直都在使用實驗室自己配制的PBS當作稀釋液, 然而卻沒有注意到自己所配制的PBS由于長期存放, pH已經(jīng)偏到了7.8。而科研ELISA試劑盒所要求的最佳反應環(huán)境是pH 7.2 - 7.4。這一點偏差, 完全能夠讓抗原抗體的結合效率大幅度降低。
找到問題之時, 老趙馬上更換了試劑盒所配套的稀釋液, 接著將所有樣本統(tǒng)一進行了一回預實驗, 進而確定出了最佳的稀釋倍數(shù)。他并且在每一步孵育之后嚴格把控洗板次數(shù), 由三次提升到五次, 每次浸泡時間必定不少于30秒。結果第二批數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出來, 標曲R2值徑直飆升至0.993, CV值降低到4%以內(nèi)。他講在那一刻他險些在實驗室中呼喊出來。
從那之后, 老趙變?yōu)榱怂锏摹癊LISA顧問” , 每當有新同事詢問科研ELISA試劑盒怎樣才能夠得出出色數(shù)據(jù)時 , 他都會率先講出三句話；其一, 除非你做了嚴謹?shù)膶Ρ闰炞C , 否則永遠不要對試劑盒自身產(chǎn)生猜疑 ；其二, 相較于試劑盒品牌 , 操作細節(jié)要重要百倍 ；其三, 你的樣本前處理決定了實驗的成敗。
在2024年的夏天之時, 老趙碰到了更為巨大的挑戰(zhàn), 他所負責的, 是一個進行跨省合作項目的樣本檢測工作, 樣本方面, 類型從血清轉(zhuǎn)變成為了細胞裂解液, 這種樣本, 其成分繁雜, 其中含有數(shù)量十分多的去垢劑以及蛋白酶抑制劑, 對于ELISA體系而言, 干擾程度極大, 最初, 當他依照常規(guī)方法去操作的時候, 結果是所有樣本的OD值, 都低到了極其離譜的程度, 幾乎等同于是空白孔, 老趙心里明白, 問題并不出在科研ELISA試劑盒那里, 而是樣本當中的成分, 將檢測抗體給“毒死”了。
他查驗了海量文獻, 又給試劑盒生產(chǎn)廠家的技術支持打了三次電話, 后來確定了一項優(yōu)化方案: 先使用透析袋把小分子干擾物消去, 接著用試劑盒所建議的稀釋液進行1: 10的稀釋之后去上樣。他還對樣本孵育時間做了調(diào)整, 從小而普通平常的60分鐘延長至90分鐘, 并且在孵育進程里輕輕進行振蕩。這一回實驗取得了巨大成功, 所有樣本的檢測數(shù)值均在標曲范圍以內(nèi), 對方實驗室再次測量之后數(shù)據(jù)完全相符, 項目順利完成結題。
之后那次, 老趙總結出了這么一句話: “科研ELISA試劑盒并非是無所不能的, 然而它能夠助力你去解決你根本想象不到的各類問題, 不過其前提條件是你必須要懂得它?！? 之后他還特意整理了一份寫滿各種指示明細的操作清單: 里邊從試劑平衡所需的時間（最少得30分鐘）開始, 一直到洗板機管路的日常維護要求（每周使用0.1%次氯酸鈉去沖洗一回）, 又從標準品經(jīng)復溶過后的分裝保存要點（一次性進行分裝, 防止反復出現(xiàn)凍融情況）, 延續(xù)到顯色液應當避光并且要現(xiàn)配現(xiàn)用。
當下, 老趙已然身為研究所的實驗室技術主管, 然而, 他每一周依舊會親自帶領新人去做一回 ELISA 實驗。他宣稱, 這并非是由于他對別人不信任, 而是在于 ELISA 乃是免疫檢測的“基本功”, 每一個步驟操作的習慣都會對一個人對于整個實驗體系的理解存在影響。
回想起老趙的那些經(jīng)歷, 我內(nèi)心所浮出的極為強烈的感受是, 好多人在進行ELISA實驗的時候遭遇失敗, 其第一個下意識的反應便是去更換試劑盒, 然而實際上在市面上占據(jù)主流地位的科研方面的ELISA試劑盒, 只要它是經(jīng)由正規(guī)的渠道所購得的打著品牌的產(chǎn)品, 那它的質(zhì)量都是能夠達標的, 真正使得差距被明顯拉大的, 乃是操作者自身所具備的經(jīng)驗以及對于細節(jié)部分的掌控調(diào)控的能力, 要是你此時此刻正受陷于ELISA實驗當中, 那不妨先讓自己的心安靜下來去回想思考一下, 溫度是不是一直保持恒定不變, 洗板的操作是不是足夠徹底, 樣本在進行前期處理的時候是不是遵循規(guī)范, 試劑是不是處于有效期之內(nèi)而且存儲的方式是正確無誤的。
這般看上去毫不起眼的點, 常常便是對成敗起著決定作用的關鍵所在。老趙歷經(jīng)三年時間, 憑借上千塊板子換來的那些教訓, 才得到了這些經(jīng)驗, 然而你眼下僅僅只需花費十幾分鐘去讀完這篇文章, 便能夠直接獲取他踩坑之后的所有收獲。期望你下一回打開科研ELISA試劑盒之際, 心里已然有底了。
