不久前, 有個(gè)做寵物進(jìn)出口貿(mào)易的, 是我的朋友, 叫老張, 他險(xiǎn)些因?yàn)橐慌浳锒庥鰳O大困境、吃大破虧。
有個(gè)老張, 干這一行已經(jīng)有七八年時(shí)間了, 主要的事情是幫忙給國內(nèi)外的客戶去辦理寵物的出入境檢疫的手續(xù)。在去年的十一月份, 他接了一個(gè)很急得單子, 有一批從歐洲那邊引進(jìn)的賽級犬, 需要在一個(gè)星期之內(nèi)完成在國內(nèi)的檢疫審批, 為的是趕上國內(nèi)舉辦的一場大型犬展、按照相應(yīng)的流程來看, 所有要進(jìn)口的犬只必須得完成狂犬病抗體檢測, 以及其他幾種特定病原的核酸檢測之后, 才能夠拿到檢疫合格證明。
老張?jiān)日J(rèn)為這個(gè)單子不存在什么問題, 與之合作的實(shí)驗(yàn)室一直以來都是國內(nèi)規(guī)模較大且資質(zhì)完備的第三方檢測機(jī)構(gòu)。然而卻偏偏不巧, 那家實(shí)驗(yàn)室的PCR核酸檢測試劑盒庫存在這個(gè)時(shí)候出現(xiàn)了問題, 此實(shí)驗(yàn)室之前采購的某個(gè)品牌試劑盒, 其檢測靈敏度始終不太穩(wěn)定, 特別是在低病毒載量樣本的檢出率方面, 老是忽高忽低的。實(shí)驗(yàn)室那邊告知他, 近期有好幾批送去檢驗(yàn)的樣本, 由于試劑盒的靈敏度未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn), 致使檢測結(jié)果出現(xiàn)了“灰區(qū)”, 這是處于陽性與陰性之間的模糊區(qū)域, 樣本得重新進(jìn)行提取以及再次檢驗(yàn)。
老張聽聞之后, 腦袋瞬間變得很大。那些賽級犬, 已然在隔離場之中待了三天時(shí)間, 每一天僅僅是食宿, 加上人工護(hù)理費(fèi)用, 這就是一筆數(shù)額不算小的開支。要是繼續(xù)拖延下去, 不但沒辦法趕上犬展, 而且還極有可能會面臨高額的違約金, 這種情況是事實(shí)啊。
他問詢我是不是存在靠譜些的動物檢疫PCR檢測試劑盒渠道, 最好是那類靈敏度高的, 特異性強(qiáng)的, 批間差穩(wěn)定狀態(tài)的, 而且供貨周期需要短的。他講, 這幾年他手上因檢測試劑盒質(zhì)量出現(xiàn)問題的案例并非僅這一個(gè)。有的試劑盒在擴(kuò)增效率方面呈現(xiàn)不佳狀況, 致使Ct值偏高, 明明動物是健康的, 然而結(jié)果卻疑似陽性；有的試劑盒在運(yùn)輸以及儲存進(jìn)程里, 由于冷鏈斷裂, 致使酶失去活性, 整批試劑徑直報(bào)廢。
動物檢疫中，PCR檢測試劑盒的靈敏度為什么那么重要？
老張后來特地去進(jìn)一步清楚地知曉了一番, 才弄明白為何試劑盒的靈敏度是決定檢疫成敗的極為重要的因素。在動物檢疫的實(shí)際操作當(dāng)中, 特別是針對進(jìn)口動物的潛伏期感染進(jìn)行篩查時(shí), 好多動物盡管已然攜帶病原體, 然而其體內(nèi)的病毒載量極低, 處于感染的早期階段。要是試劑盒的靈敏度缺乏, 沒辦法檢測到低拷貝數(shù)的核酸, 就會出現(xiàn)“假陰性”的狀況。而假陰性所表示的是, 攜帶疾病的動物順利地通過檢疫關(guān)卡, 進(jìn)入國內(nèi)進(jìn)行繁育或者展示的種群當(dāng)中, 一旦條件適宜, 病毒大量地進(jìn)行復(fù)制, 就會致使疫病出現(xiàn)擴(kuò)散。這幾個(gè)大型養(yǎng)殖場, 在過去國內(nèi)的幾年間, 出現(xiàn)了疫情爆發(fā)情況下, 老張講, 事后經(jīng)過溯源查找, 發(fā)現(xiàn)問題是出在了入境環(huán)節(jié)的檢測試劑盒靈敏度并未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)這件事上。
不同品牌PCR核酸檢測試劑盒，特異性差異有多大？
老張頭疼的指標(biāo), 除了靈敏度, 還有特異性。他曾遇特殊情況, 某批試劑盒檢測犬細(xì)小病毒時(shí), 總與某些犬腺病毒樣本產(chǎn)生交叉反應(yīng), 致使非特異性擴(kuò)增。這代表試劑盒會將無害腺病毒誤判為細(xì)小病毒。實(shí)驗(yàn)室技術(shù)員告知老張, 此交叉反應(yīng)在低質(zhì)量試劑盒中常見, 主要緣由是引物和探針序列設(shè)計(jì)不合理, 未針對靶基因高度保守區(qū)域優(yōu)化, 或是用了非特異性強(qiáng)的探針修飾基團(tuán)。老張后怕著說道, 要是當(dāng)時(shí), 他所使用的果然是那種試劑盒, 那么那一批健康的賽級犬吶, 便極有可能會被錯(cuò)誤地判定為陽性, 進(jìn)而, 便會被強(qiáng)制進(jìn)行撲殺又或者是遣返, 如此一來, 所造成的損失那可就是無法估量的了。
批間差，往往是實(shí)驗(yàn)室最頭疼的問題
老張還曾向我提醒, 長期使用同一批次試劑盒于實(shí)驗(yàn)室而言, 一般不會出現(xiàn)嚴(yán)重狀況, 然而一旦更換批次, 倘若批間差把控不佳, 便會出現(xiàn)結(jié)果不一致情形。今年三月, 他曾被一家供應(yīng)商坑過一回。那家供應(yīng)商的第一批次試劑盒使用情況尚可, 不過第二批次到貨后, 實(shí)驗(yàn)室發(fā)覺同樣一批樣本的Ct值平均比先前竟高出將近3個(gè)循環(huán)。這所意味的是，原本能夠判定為陰性的樣本, 在新批次里卻變?yōu)榱巳蹶栃?。?shí)驗(yàn)室不得以再次校準(zhǔn)儀器, 還得重新取出所有樣本予以比對, 無端浪費(fèi)了一周時(shí)間。老張講, 批間差較大的根本緣由, 常常是處于原材料質(zhì)控體系不夠嚴(yán)格狀態(tài)的, 就像反轉(zhuǎn)錄酶其活性在不一樣批次間是存有波動情況的, 又或者引物探針的合成純度并非那樣保持穩(wěn)定情況的。
冷鏈運(yùn)輸，真的影響試劑盒的保質(zhì)期嗎？
關(guān)乎此事, 老張具備最為充分的發(fā)言權(quán), 他存在一個(gè)維系長久合作關(guān)系的供應(yīng)商, 于去年夏天之時(shí)發(fā)遣一批PCR核酸檢測試劑盒抵達(dá)他的實(shí)驗(yàn)室, 然而因物流運(yùn)輸行程期間, 冰袋出現(xiàn)融化狀況, 致使試劑盒于常溫環(huán)境下暴露了近乎8個(gè)小時(shí)之久, 實(shí)驗(yàn)室的負(fù)責(zé)人在接收貨物并開展檢測之際發(fā)現(xiàn), 試劑盒當(dāng)中的酶混合液其活性顯著降低, 擴(kuò)增效率遭受極大程度的影響而大打折扣, 最終整批試劑盒只能作報(bào)廢處置, 供應(yīng)商盡管愿意提供賠償, 可老張這邊錯(cuò)失了最佳的檢測窗口期, 從而使得一批有待出口的寵物只能延緩航班出發(fā)。老張日后更換了一家具備獨(dú)立冷鏈物流系統(tǒng)的供應(yīng)商, 發(fā)貨之際全程進(jìn)行溫度控制監(jiān)測, 并且實(shí)時(shí)回傳溫度方面的數(shù)據(jù), 如此這般才將后顧之憂給解決掉了。
如何評估PCR核酸檢測試劑盒的穩(wěn)定性？
老張有著這樣一個(gè)經(jīng)驗(yàn), 那便是察看試劑盒在加速穩(wěn)定性測試?yán)锏臄?shù)據(jù)。他跟我講, 存在一個(gè)靠譜的供應(yīng)商之舉, 就會于產(chǎn)品說明書當(dāng)中給出至少7天、37℃條件下的加速老化測試數(shù)據(jù)。要是試劑盒處于加速條件時(shí), 其擴(kuò)增效率的下降幅度把控在5%以內(nèi), 這也就是說它的穩(wěn)定性是具備可靠性的。他還著重特別強(qiáng)調(diào)了此事, 那就是要去關(guān)注試劑盒的保存液配方, 像是有沒有添加適宜的核酸酶抑制劑、保護(hù)劑以及穩(wěn)定劑, 這些成分對試劑盒在長期儲存以及運(yùn)輸過程里的性能保持能力起著決定性作用。
什么才是靠譜的PCR核酸檢測試劑盒供應(yīng)商？
遭受這一系列教訓(xùn)之后, 老張如今挑選供應(yīng)商的標(biāo)準(zhǔn)變得極其苛刻。其一, 供應(yīng)商得具備 ISO13485 體系認(rèn)證, 此即表明其生產(chǎn)流程受嚴(yán)苛醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系規(guī)制。其二, 每一回之出廠質(zhì)檢報(bào)告供應(yīng)商都得提供, 涵蓋靈敏度、特異性、精密度以及穩(wěn)定性這些翔實(shí)數(shù)據(jù)。其三, 供應(yīng)商要有完備售后技術(shù)支撐, 在實(shí)驗(yàn)室出具異常結(jié)果之際, 能夠即刻給予技術(shù)指導(dǎo)以及排查方案。第四, 供應(yīng)鏈的響應(yīng)所需之時(shí)要快捷迅速, 老張當(dāng)下責(zé)成供應(yīng)商務(wù)必于24小時(shí)之內(nèi)發(fā)出貨品, 而且要支持小批量的訂購行為, 以此便利實(shí)驗(yàn)室開展預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證工作。
實(shí)驗(yàn)人員操作，會影響PCR檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性嗎？
老張最后跟我分享了個(gè)易被忽視的問題, 那就是操作人員的操作規(guī)范, 他講, 縱然試劑盒再好 , 要是操作人員不依從標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)流程來執(zhí)行 , 結(jié)果依舊會出狀況 , 好比在核酸提取階段 , 要是樣本處理時(shí)長過久或者離心條件有誤 , 就有可能致使核酸降解或者產(chǎn)生抑制物殘留 , 在上機(jī)操作時(shí) , 要是加樣量不準(zhǔn)確且封膜不嚴(yán)密 , 同樣可能導(dǎo)致擴(kuò)增失敗或者出現(xiàn)蒸發(fā)現(xiàn)象。老張當(dāng)下要求自己的合作實(shí)驗(yàn)室, 在每次打算更換新一批次的試劑盒以前, 務(wù)必要先開展一回平行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn), 將已知的陽性對照以及陰性對照拿來去驗(yàn)證此批次試劑盒于實(shí)際操作條件之下的表現(xiàn)。
折騰了兩年, 老張總算找到了一家PCR核酸檢測試劑盒供應(yīng)商, 這家供應(yīng)商各方面表現(xiàn)較為均衡。那批賽級犬按期取到了合格的檢疫報(bào)告, 順利趕上了犬展。老張如今見人就講, 選對試劑盒, 不僅是為省錢, 更是為規(guī)避風(fēng)險(xiǎn)。從事動物檢疫這一行, 一旦走錯(cuò)一步, 便會滿盤皆輸。
