前言：為什么這篇文章值得你花十分鐘讀完？
倘若你正因為實驗數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出不穩(wěn)定的狀況, 或者試劑盒的靈敏度達(dá)不到要求, 又或者供應(yīng)商缺乏靠譜性而感到頭疼不已, 那么這篇文章便是專門為你所撰寫的。我結(jié)識了一位身處于生物行業(yè)歷經(jīng)摸索打拼長達(dá)八年之久的朋友老周, 他近期剛剛親身遭遇了一場圍繞熒光定量PCR試劑盒展開的選型方面的風(fēng)波。從伊始險些遭受欺騙, 一直到最終成功尋覓到最佳解決方案, 他那段親身經(jīng)歷幾乎全面覆蓋了你在選購試劑盒期間將會遭遇的每一處陷阱。當(dāng)你看完他所經(jīng)歷的這段故事之后, 你起碼能夠避免走上一段長達(dá)半年的彎路。
我那個“踩過雷”的朋友老周
我在前東家認(rèn)識的老同事老周, 如今是華東一家第三方醫(yī)學(xué)檢驗所的實驗室負(fù)責(zé)人, 今年年初, 他們實驗室承接了一個大單, 此單子乃為某省級疾控中心提供一批呼吸道病原體的熒光定量PCR檢測服務(wù), 單子金額不小, 然而時間緊迫, 樣本數(shù)量龐大, 對試劑盒的穩(wěn)定性有著極高要求。
當(dāng)初老周跟我講, 說道: “這一回的這批樣本的話, 一旦出現(xiàn)問題, 那么我們實驗室的那塊牌子就會被砸掉啦?！薄?/p>
選購熒光定量PCR試劑盒時，我朋友第一步就踩了坑
熒光定量PCR試劑盒的靈敏度到底重不重要？
老周原來使用的是那種有著較長歷史的進(jìn)口試劑盒, 其供貨向來保持穩(wěn)定狀態(tài)。然而在今年年初的時候, 供應(yīng)商突然間告知他關(guān)于成本出現(xiàn)上漲情況, 然后表示單單價格就要上漲百分之四十。老周在心里仔細(xì)地進(jìn)行了一番盤算推算, 發(fā)現(xiàn)這個項目的利潤原本就并非很高, 如果依照這樣的價格去進(jìn)行操作, 那么做一筆單子就會虧損一筆單子。
于是, 他著手尋覓起替代品來, 市面上國產(chǎn)熒光定量PCR試劑盒在這些年里發(fā)展得極為迅速, 其價格大概僅為進(jìn)口的一半, 老周懷揣著試試看的心理, 經(jīng)由朋友的推薦與一家新廠商有了接觸。
在首次進(jìn)行測試之際，廠商所提供的樣品展現(xiàn)出的狀況還算可以。然而, 老周卻遺漏了最為關(guān)鍵的那一點(diǎn), 即他未曾開展大批量的穩(wěn)定性驗證。
大批量檢測時，試劑盒的穩(wěn)定性為何容易翻車？
項目正式啟動后的第三天，問題就來了。
那天, 老周于實驗室之中一直待到凌晨兩點(diǎn), 目光緊盯著熒光定量PCR儀上面的擴(kuò)增曲線, 其臉色逐漸愈發(fā)難看。同一批樣本, 不同孔位的Ct值竟然相差了整整2個循環(huán), 此情況意味著在這一批樣本里頭, 有些樣本將會被判斷為陽性, 而有些樣本則會被認(rèn)為是陰性, 從而徹徹底底地失去了相互間的可比性。
而后老周跟我講, 那時他冷汗已然下來了。這一批樣本次日便要出具報告, 要是數(shù)據(jù)并非可靠, 不但得賠錢, 而且還會得罪客戶。
熒光定量PCR試劑盒的批間差如何影響實驗結(jié)果？
批間差大，實驗數(shù)據(jù)能信嗎？
當(dāng)夜, 老周費(fèi)盡周折翻找出廠商的質(zhì)檢報告。他察覺到, 此批次試劑盒的批間差數(shù)據(jù)并非令人欣然接納之物。那所謂的批間差, 直白來講, 乃是同一批試劑盒于不同生產(chǎn)批次之際所呈現(xiàn)的性能之差異。批間差大這種情況預(yù)示的情形表明, 此番實驗的結(jié)果與下一回實驗的結(jié)果極有可能全然無法契合。
在熒光定量PCR這般具備高靈敏度的檢測里頭, 批間差屬于隱性殺手, 它并非如同靈敏度低那般, 能夠一眼就被識別出來, 然而它可以致使你的整個實驗喪失重復(fù)性, 對于第三方檢測機(jī)構(gòu)來講, 重復(fù)性差等同于沒有公信力。
彼時, 老周當(dāng)即做出一項決定, 那便是停止該供應(yīng)商所供應(yīng)的試劑盒, 轉(zhuǎn)而再度啟用原本的進(jìn)口品牌, 與此同時, 緊急去聯(lián)系新的國產(chǎn)供應(yīng)商。
我朋友是如何找到靠譜的熒光定量PCR試劑盒的？
選熒光定量PCR試劑盒，到底要看哪幾個指標(biāo)？
歷經(jīng)這一回折騰, 老周針對選型確立了嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臉?biāo)準(zhǔn), 他跟我講, 當(dāng)下他挑選熒光定量PCR試劑盒的時候, 會著重去看三項指標(biāo):
有一個叫做靈敏度的, 是那種硬指標(biāo)性質(zhì)的, 它必須得達(dá)到單拷貝檢測的級別才行的。老周講了這么一件事, 好多廠商進(jìn)行宣傳的時候, 都會宣稱自身靈敏度是很高的, 然而在實際跑一下的情況下, 低拷貝的樣本常常就出現(xiàn)漏檢的情況了。
批次之間的差異。老周當(dāng)下要求供應(yīng)商給出連續(xù)三個批次的質(zhì)量檢驗報告, 批次和批次之間的CT值波動一定要小于0.5。要是沒辦法達(dá)到這一要求, 便會直接將其排除。
穩(wěn)定性驗證, 不是進(jìn)行一次測試就歇手, 而是得連續(xù)運(yùn)行三周, 每周要超過50個樣本, 去觀望數(shù)據(jù)的一致性。
如何判斷熒光定量PCR試劑盒的供應(yīng)商是否靠譜？
老周隨后借助行業(yè)里的一個同行群組, 尋得了一家口碑良好的國產(chǎn)制造商。該制造商的銷售經(jīng)理并未夸夸其談, 而是徑直給老周郵寄了三批不同批次號的試劑盒, 還附帶了詳盡的質(zhì)量控制數(shù)據(jù)。
另老周更為放心的是, 該家廠商的技術(shù)支撐主動提出, 前往實驗室現(xiàn)場配合驗證。老周講道, 這種姿態(tài)自身便表明, 他們對自身的產(chǎn)品懷有信心。
結(jié)果驗證出來之時, 老周滿心盡是滿足之感。對于三批的試劑盒, 靈敏度方面達(dá)標(biāo)得以實現(xiàn)、特異性方面達(dá)標(biāo)得以達(dá)成、批間差方面同樣達(dá)標(biāo)得以完成, 甚至其在低拷貝樣本之上的表現(xiàn), 遠(yuǎn)比進(jìn)口品牌還要優(yōu)良些許。
老周現(xiàn)在怎么用熒光定量PCR試劑盒做實驗？
熒光定量PCR試劑盒的正確使用流程是什么？
老周現(xiàn)在給實驗室定了一套標(biāo)準(zhǔn)流程：
第一個步驟是, 每當(dāng)有貨物到達(dá)之后，首先要去做那種小批量類型的驗證, 使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品去跑上一回, 以此來確定試劑盒的性能是不是與質(zhì)檢報告相一致。
第二步, 在每次進(jìn)行實驗之前, 都要去做一次標(biāo)準(zhǔn)曲線。老周講, 有許多實驗室為了圖省事, 會使用之前就已經(jīng)做好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。然而不同批次的試劑盒, 其擴(kuò)增效率搞不好是不一樣的, 使用以前的曲線就會把誤差給引入進(jìn)來。
第三步, 每時的實驗都要去設(shè)定陽性以及陰性的對照, 這看上去好像是挺簡單的, 然而老周卻察覺到, 好多的實驗室為了能夠節(jié)省金錢以及省事, 就會去削減對照的孔位。如此一來結(jié)果出現(xiàn)了問題, 根本就查找不出來究竟是試劑盒的問題還是操作方面的問題。
老周現(xiàn)在的實驗數(shù)據(jù)穩(wěn)定了嗎？
熒光定量PCR試劑盒用對了，實驗效率能提升多少？
自打更換了新的試劑盒, 并且把流程給規(guī)范了之后, 老周所在的實驗室就再也未曾出現(xiàn)過數(shù)據(jù)波動的情況。就在上個月, 他們的那個省級項目順利地完成了結(jié)項, 客戶對于數(shù)據(jù)的重復(fù)性以及準(zhǔn)確性感到極為滿意。
老周進(jìn)行了一次算賬, 新試劑盒的價格是進(jìn)口品牌的百分之六十, 然而性能并非存在差別, 依據(jù)他們實驗室每年的試劑盒消耗數(shù)量為兩千個來計算, 一年僅僅試劑盒這個方面的費(fèi)用就能夠節(jié)省近乎四十萬。
尤為關(guān)鍵且重中之重的一點(diǎn)在于, 鑒于相關(guān)數(shù)據(jù)始終保持穩(wěn)定, 在實驗室范疇之內(nèi), 對應(yīng)客戶的投訴比率, 由原本的百分之五, 已然降低至近乎于零的程度。老周明確聲稱, 表示這才是于選型這一環(huán)節(jié)之上投入精力所具備的現(xiàn)實本真價值所在。
結(jié)尾：熒光定量PCR試劑盒選型，關(guān)鍵是“驗證”二字
老周所歷經(jīng)的事情, 實際上給咱們所有人都投送了一個提醒, 在熒光定量PCR試劑盒的挑選方面, 千萬永遠(yuǎn)都別單單僅憑看著價格以及宣傳所用的資料來進(jìn)行抉擇。而真真切切實實在在的考驗, 卻是源自于大批量的狀況下、長時間的范疇之中、好多批次時經(jīng)歷的驗證呀。
要是此刻你正為試劑盒挑選型號而犯愁, 那不妨先自行詢問自身下述三個問題: 你的供應(yīng)商有沒有膽量交出具備連貫性的三個批次的質(zhì)檢報告? 你開展過超越50個樣本數(shù)量的穩(wěn)定性測試嗎? 你所擁有的實驗數(shù)據(jù)究竟有多少次是值得信賴的?
把這三個問題考慮明白, 你的選型便不會出現(xiàn)偏差。老周講, 他如今每次碰到新供應(yīng)商, 都會率先詢問這三個問題。只有能夠回答上來的, 方才值得投入時間做進(jìn)一步的了解。
