苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內苯丙烷類代謝的關鍵酶，與一些重要的次生物質如木質素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關，在植物正常生長發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。
測定原理
PAL催化L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm處有最大吸收值，通過測定吸光值升高速率計算PAL活性。
所需的儀器和用品
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入4mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：液體1mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取
按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
3、在EP管或96孔UV板中按順序加入下列試劑
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試劑名稱（μL） |
測定管 |
對照管 |
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樣本 |
5 |
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試劑一 |
145 |
150 |
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試劑二 |
40 |
40 |
混勻，30℃ 準確反應30min
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試劑三 |
10 |
10 |
混勻，靜置10min后， 290nm處記錄測定管吸光值A1和對照管吸光值A2，△A=A1-A2。
注意：對照管只要做一管
PAL活性計算
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個酶活性單位。
PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（Cpr× V樣）÷0.1÷T =13.3×ΔA÷Cpr
單位定義：每g組織在每mL反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個酶活性單位。
PAL（U/g鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.1÷T =13.3×ΔA÷W
V反總：反應體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.005mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
用96孔板測定的計算公式如下
（1） 按蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.05為一個酶活性單位。
PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.05÷T =26.6×ΔA÷Cpr
單位定義：每g組織在每mL反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.05為一個酶活性單位。
PAL（U/g鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.05÷T =26.6×ΔA÷W
V反總：反應體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.005mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
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資料/datasheet
