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Hi T7 RNA Polymerase
A-PJ1058
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 Hi T7 RNA Polymerase

10KU

A-PJ1058

Hi T7 RNA Polymerase

>1MU

A-PJ1058

描述:

Hi T7 RNA Polymerase 對 T7 噬菌體啟動子具有高度的特異性,并可以其作為啟動子,DNA 作為模板體外合成正義鏈。雙鏈線性質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物均可作為該酶的底物模板。Hi T7 RNA 聚合酶經(jīng)電子重構(gòu)架及庫篩選,與 Wild型比較來看,酶的 DNA 模板結(jié)合區(qū)域親和力更高,使其具有持續(xù)合成能力,從而獲得更高的產(chǎn)量,并易于長片段RNA 的合成。該酶為重組純化制品,無 DNase 和 RNase污染。

活性定義:在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下,37℃ 1 小時內(nèi)將 1 nmol的 ATP 摻入酸不溶物所需要的酶量定義為一個活性單位。
儲存:置于-20°C 可保存 2 年,如有白色沉淀析出,37°C溫浴 5min 后使用,不影響性能。
熱失活:75°C,10min。

2. 37℃孵育 2-3h (通常 3h,即可獲得>80 μg 的總產(chǎn)量)。
3. 反應(yīng)完畢后,如需去除模板 DNA,加入 Dnase I(2U)37℃處理 15min。
4. 終止反應(yīng):75℃加熱 10min,或加入 2 μl 0.5M 的 EDTA(pH8.0)。
注意事項
1.質(zhì)粒DNA的質(zhì)量影響RNA的量和完整性。質(zhì)粒DNA的濃度越高,生成RNA的質(zhì)量越高,質(zhì)粒模板DNA應(yīng)該無RNase污染.
2.該酶為高產(chǎn)酶,RNA 產(chǎn)量極高,在反應(yīng)完畢后,通常存在肉眼可見的渾濁狀態(tài),其為反應(yīng)副產(chǎn)物焦磷酸鎂,此時表明反應(yīng)劇烈。在下一步 RNA 純化前,可通過短暫離心去除沉淀物,此過程并不丟失 RNA。
3. 通常轉(zhuǎn)錄后 RNA 產(chǎn)物濃度在 2-4 μg/μl,因此電泳時,僅需取 0.05-0.1 μl 即可。

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