使用目的：
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中偽狂犬病毒 gB 蛋白（PRV-gB）表達。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬偽狂犬病毒 gB 蛋白（PRV-gB）表達。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中偽狂犬病毒 gB 蛋白（PRV-gB）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中豬偽狂犬病毒 gB 蛋白（PRV-gB）的存在與否。
試劑盒組成
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1 |
30 倍濃縮洗滌液 |
20ml×1 瓶 |
7 |
終止液 |
6ml×1 瓶 |
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2 |
酶標試劑 |
6ml×1 瓶 |
8 |
陽性對照 |
0.5ml × 1瓶 |
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3 |
酶標包被板 |
12 孔×8 條 |
9 |
陰性對照 |
0.5ml × 1瓶 |
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4 |
樣品稀釋液 |
6ml×1 瓶 |
10 |
說明書 |
1 份 |
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5 |
顯色劑 A 液 |
6ml×1 瓶 |
11 |
封板膜 |
2 張 |
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6 |
顯色劑 B 液 |
6ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1 個 |
1 .標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照 1 孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl ，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl ，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
臨界值（CUTOFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUTOFF）者為豬偽狂犬病毒 gB 蛋白（PRV-gB）陰性
陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUTOFF）者為豬偽狂犬病毒 gB 蛋白（PRV-gB）陽性。
注意事項
1 ．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2 ．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
3 ．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
4 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5 ．底物請避光保存。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7 ．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1 ．試劑盒保存：；2-8℃。
2 ．有效期：6 個月
掃描二維碼
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資料/datasheet
