基礎(chǔ)研究里常用的工具是腫瘤細(xì)胞株，它們來源于腫瘤組織，經(jīng)過體外培養(yǎng)得到穩(wěn)定增殖能力。不同細(xì)胞株有著各自獨(dú)特的遺傳背景與生長特性，開展實(shí)驗(yàn)的前提是理解這些差異。選擇合適的細(xì)胞株，要綜合考量研究目的、細(xì)胞特性以及實(shí)驗(yàn)條件。
腫瘤細(xì)胞株如何正確復(fù)蘇
急需快速解凍被凍存的細(xì)胞株，以此來降低冰晶造成損傷的風(fēng)險(xiǎn)，從液氮當(dāng)中取出凍存管之后，要馬上在37℃的水浴里輕柔地晃動(dòng)，一直到僅僅剩下少量冰核為止，用75%乙醇擦拭管壁，把細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)溫培養(yǎng)液的離心管里，緩慢地進(jìn)行稀釋，以低速離心的方式去除凍存液里的二甲基亞砜，再用新鮮培養(yǎng)液重新懸浮起來之后進(jìn)行接種，復(fù)蘇后的次日需要更換培養(yǎng)液，去除不能夠貼壁的死細(xì)胞，繼續(xù)去觀察生長狀態(tài)。
腫瘤細(xì)胞株傳代密度多少合適
細(xì)胞傳代時(shí)的密度，對(duì)其生長曲線以及實(shí)驗(yàn)重復(fù)性有著直接的影響，一般而言，當(dāng)貼壁細(xì)胞的融合程度抵達(dá)80%至90%這個(gè)范圍的時(shí)候，就要展開傳代操作，而消化所需的時(shí)間，得依據(jù)細(xì)胞系來加以調(diào)整，就像A549細(xì)胞，通常是采用0.25%的胰蛋白酶去處理2到3分鐘，傳代比例常常是1:3至1:6，以此來保證接種之后的細(xì)胞密度處于每平方厘米1×10^4至5×10^4這個(gè)區(qū)間之內(nèi)，要是密度過低，就會(huì)讓停滯期得以延長，要是過高的話，則會(huì)加速接觸抑制以及表型漂移，建議每次都對(duì)代次以及形態(tài)變化進(jìn)行記錄。
腫瘤細(xì)胞株污染如何快速判斷
用肉眼去觀察培養(yǎng)液是不是渾濁，pH有沒有突變，是否會(huì)出現(xiàn)絮狀物。在顯微鏡下，若細(xì)菌被污染，其表現(xiàn)是有細(xì)小顆粒進(jìn)行快速運(yùn)動(dòng)，要是真菌被污染，能看見菌絲或者孢子團(tuán)，而支原體被污染的話，則需要借助熒光染色或者PCR檢測才行。在日常的操作當(dāng)中，要是細(xì)胞生長忽然間變慢，形態(tài)變得異常，或者邊緣變得模糊，那就應(yīng)該警惕存在隱性污染。建議定期使用沒有抗生素的培養(yǎng)液進(jìn)行檢測，并且分離可疑的細(xì)胞株，防止交叉污染對(duì)整批實(shí)驗(yàn)造成影響。
腫瘤細(xì)胞株凍存液怎么配
經(jīng)典凍存液配方是，完全培養(yǎng)液、胎牛血清以及二甲基亞砜按照7:2:1的體積比來混合，也能夠使用商品化的無血清凍存液。凍存細(xì)胞的時(shí)候，細(xì)胞需處于對(duì)數(shù)生長期，活率要高于90%。重懸密度要控制在每毫升1×10^6至5×10^6，分裝到凍存管之后，采用程序降溫盒在-80℃過夜存放，次日再轉(zhuǎn)入液氮進(jìn)行長期保存。每一個(gè)批次都應(yīng)該留取樣本進(jìn)行復(fù)蘇驗(yàn)證，以此確保凍存效果穩(wěn)定。
使用腫瘤細(xì)胞株之際，您遭遇過哪些難以化解的污染狀況，或者狀態(tài)方面的問題呢？歡迎于評(píng)論區(qū)分享交流經(jīng)驗(yàn)。
