ATCC細(xì)胞有哪些常見類型
超過3000種細(xì)胞系被收納于ATCC細(xì)胞庫之中，此范圍涉及人類、動物以及微生物的來源領(lǐng)域，存在于實驗室里最為常用的細(xì)胞有HeLa（人宮頸癌細(xì)胞）、還有HEK293（人胚腎細(xì)胞）、另外包含CHO（中國倉鼠卵巢細(xì)胞）以及各種各樣的原代細(xì)胞，每一種細(xì)胞之中都具備獨特的生長特性以及培養(yǎng)要求，舉例來說懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞他們的傳代方法是完全不一樣的，為設(shè)計相應(yīng)的實驗方案，第一步需要去了解不同ATCC的細(xì)胞他們的基礎(chǔ)相關(guān)屬性。
如何正確復(fù)蘇ATCC細(xì)胞
物品被收到之后，此物品是ATCC凍存管，復(fù)蘇操作對于細(xì)胞活率有著直接決定性作用，建議采用快速解凍法，具體而言就是于37℃水中放置凍存管，此放置過程中要輕輕搖動，在2分鐘之內(nèi)要實現(xiàn)完全融化，要注意情形是避免有水流淹沒管蓋，目的是防止出現(xiàn)交叉污染，解凍之后要采用含有血清的完全培養(yǎng)基去稀釋凍存液，還得通過低速離心的方式來去除DMSO殘留，接種之后24小時以內(nèi)不要進(jìn)行頻繁觀察，要讓細(xì)胞能夠安靜地貼壁，復(fù)蘇成功率與操作規(guī)范程度之間有著密切聯(lián)系，每個步驟都必須嚴(yán)格進(jìn)行記錄。
ATCC細(xì)胞傳代注意事項
在細(xì)胞密度抵達(dá)80%至90%之際，就應(yīng)當(dāng)及時去進(jìn)行傳代操作。首先要把舊培養(yǎng)基給吸除掉，接著用預(yù)熱過的PBS輕輕地漂洗兩次，以此來清除掉死細(xì)胞以及殘留血清。對于貼壁細(xì)胞而言，通常會使用胰酶來進(jìn)行解離，而消化所需的時間得依據(jù)細(xì)胞類型去摸索，一般是2到5分鐘。當(dāng)看到細(xì)胞變圓、間隙增大的時候，要立刻加入含有血清的培養(yǎng)基去終止消化。傳代的比例建議按照1:3或者1:4來進(jìn)行，要是過稀的話會致使生長變得緩慢。要定期去觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，避免出現(xiàn)老化或者分化現(xiàn)象。
凍存ATCC細(xì)胞的關(guān)鍵步驟
細(xì)胞株若要長期保存，凍存液一般會采用這樣的配方，即90%血清加上10%DMSO。細(xì)胞需收集處于對數(shù)生長期的，把密度調(diào)整到每毫升大概1×10?個。細(xì)胞懸液要和預(yù)冷的凍存液進(jìn)行混合，然后分裝到凍存管里，標(biāo)記好細(xì)胞名稱、代數(shù)以及日期。采用程序降溫盒，按照每分鐘-1℃的速率降到-80℃，24小時之后再轉(zhuǎn)入液氮罐。要注意不同ATCC細(xì)胞對于凍存條件存在細(xì)微差異，比如說某些干細(xì)胞需要添加Rock抑制劑來提高復(fù)蘇率。規(guī)范化的凍存管理能確保細(xì)胞庫穩(wěn)定運(yùn)行十年以上。
