上周六的晚上，時間是十點多，朋友老馬給我發(fā)來了一條語音，其語氣之中帶著明顯的興奮之情，說道：“那個項目終于通過啦！整兩個月都在折騰我?！崩像R在一家第三方檢測機(jī)構(gòu)任職，擔(dān)任技術(shù)主管一職，其專門負(fù)責(zé)針對食品之中添加劑含量進(jìn)行分析。他所說的那個項目，所運(yùn)用的核心工具乃是比色法試劑盒。
這篇文章有著價值，它能夠告知你一個真實的實驗室工作者，如何從反復(fù)出現(xiàn)失誤、數(shù)據(jù)產(chǎn)生偏差、團(tuán)隊提出質(zhì)疑，再到最后尋找到穩(wěn)定且可使用的比色法試劑盒的整個過程。要是你也常常與比色法有接觸，或者正因為數(shù)據(jù)波動幅度大、標(biāo)準(zhǔn)曲線難以做好而感到苦惱，那么下面這五千多字的內(nèi)心經(jīng)歷路程，值得你花費(fèi)一些時間去看完。
比色法試劑盒穩(wěn)定性差怎么辦
由老馬所在并且曾在去年底承接了一批樣品的實驗室，其目的在于就要對其中幾種添加劑的含量進(jìn)行測定。依照常規(guī)流程，他們挑選了某一品牌的比色法試劑盒。老馬跟我講，在那段日子里，每天早上七點他就到達(dá)實驗室，而他做的第一件事情是開通分光光度計來進(jìn)行預(yù)熱。
但是，問題卻迅速地隨之而至了。那是同一批的樣品，由同一個人來進(jìn)行操作，然而上午所測出來的結(jié)果，跟下午測出來的結(jié)果相比，竟然能夠相差出百分之十五。于是，老馬對試劑的保存溫度，進(jìn)行了反復(fù)的檢查，對顯色時間，也進(jìn)行了精心的查看，對比色皿的清潔度，同樣進(jìn)行了再三的審視，甚至還把移液槍送去做了校準(zhǔn)?？墒牵撟龅呐挪楣ぷ鞫家呀?jīng)展開了，然而數(shù)據(jù)卻依舊并不順從要求；每個小分句后皆有標(biāo)點符號。
那會兒他特別困惑，比色法試劑盒穩(wěn)定性欠佳這個問題究竟出在了哪兒。隨后他尋找到了廠家的技術(shù)支撐，對方問了這么一句：“你們所使用的試劑盒批次號是多少？”老馬這才察覺到，他手上有著兩個批次的盒子，顯色劑的溶解度存在著顯著的差異。
這件事情使得他清楚了一個道理，比色法的試劑盒穩(wěn)定性欠佳，但其不一定是操作方面所導(dǎo)致的問題，極有可能是不同批次的試劑自身就存在著波動。自那之后，他形成了一個習(xí)慣，每當(dāng)新開啟一批盒子的時候，首先會使用標(biāo)準(zhǔn)品去跑完一整個流程，進(jìn)而確認(rèn)曲線斜率與之前批次不存在些許明顯差錯，然后才會正式進(jìn)行上樣。
比色法試劑盒操作繁瑣怎么解決
老馬解決了批次穩(wěn)定性的問題后，又碰到了新麻煩，他們實驗室日均處理樣品量在于八十個到一百二十個彼此之間，然而傳統(tǒng)的比色法試劑盒的操作步驟多之又多，光是加上樣環(huán)節(jié)要卡牢恰當(dāng)時間，再加上混勻環(huán)節(jié)要掐準(zhǔn)正確時間還不夠，還得加上靜置環(huán)節(jié)要精準(zhǔn)規(guī)劃時間，顯色的環(huán)節(jié)務(wù)必把時間掐準(zhǔn)，比起顏色也同樣要精確把時間算控制好，各個步驟都要嚴(yán)格卡時間。
在去年十二月中旬挑出的一個周三，老馬曾給我展示過他的實驗記錄本。就在那天，他需要測定四十八個樣品，針對每個樣品都要做兩個平行，再算上標(biāo)準(zhǔn)曲線點以及質(zhì)控樣物，總共會有一百二十多個反應(yīng)管。僅僅加樣這一環(huán)節(jié)，就耗費(fèi)了差不多兩個小時，期間還得時刻留意著計時器，而且不同步驟所對應(yīng)的顯色時間竟然是不一樣的。
當(dāng)年老馬開玩笑講：“我好似流水線上的工人，只是我的工位是超凈臺罷了?！彼炙妓?，比色法試劑盒操作繁雜的狀況有無優(yōu)化的法子呢。他嘗試過批量加樣，使用多通道移液器，提前配好工作液，然而步驟多終究是步驟多，不管怎樣優(yōu)化都節(jié)省不了太多時間。
今年一月初時轉(zhuǎn)機(jī)出現(xiàn)了，他前往參加一個行業(yè)交流會，在會上碰到了來自另一個實驗室的同行。這位同行告知他，他們實驗室已在大部分常規(guī)項目方面，將比色法替換成了預(yù)裝填試劑的微板形式。老馬回來之后進(jìn)行了相關(guān)查看，從而發(fā)現(xiàn)確實存在廠家做出了改進(jìn)，也就是把試劑預(yù)先分裝到微孔板里，如此一來用戶僅需添加樣品以及顯色劑，步驟減少了近乎一半。
比色法試劑盒靈敏度不夠如何提升
有句話老馬曾跟我講頗實際：“實施比色法時分那種情況而言，不怕其步驟數(shù)量多這般狀況，只怕抵達(dá)該當(dāng)?shù)脵z出相應(yīng)結(jié)果的那個時候卻沒法獲取檢出結(jié)果?！庇谒邮诌^來的那一批次樣品里頭，存在著幾個目標(biāo)物的預(yù)期濃度這種情況恰好是處于試劑盒檢測下限臨近那一帶地方。運(yùn)用常規(guī)常用的比色法試劑盒去進(jìn)行操作，信號值跟空白對照之間沒辦法拉開形成差距這樣的情形。
今年春節(jié)來臨前的那兩周時間，他始終在就這件事情持續(xù)較勁。為了這件事，他嘗試了延長顯色的時長，提高反應(yīng)的溫度，加大樣品的數(shù)量，凡是能夠想出的辦法他都去嘗試。曾經(jīng)有一回，他將顯色時間從二十分鐘延長至四十分鐘，結(jié)果信號值確實呈現(xiàn)出上升的態(tài)勢，然而空白值也隨之升高，最終信噪比幾乎沒有得到改善。
然后，他轉(zhuǎn)變了一種思緒，鑒于檢測的靈敏程度不足夠，所以，就去更換一款自身靈敏程度更高的比色法試劑盒產(chǎn)品。他對三四個品牌的產(chǎn)品使用說明進(jìn)行了對比，發(fā)覺同樣是針對同一個指標(biāo)開展檢測，有的盒子檢測下限能夠達(dá)成零點五個ppm，而有的卻僅僅只能達(dá)到兩個ppm。他挑選了檢測下限最低的那一款再度進(jìn)行操作，這一回目標(biāo)物的信號終于能夠跟空白顯著區(qū)分開來。
最大的收獲這件事給予他的是，不要在一款試劑盒上執(zhí)著地死磕，若參數(shù)不匹配的話就果斷去更換。比色法試劑盒的靈敏度乃是被設(shè)計而成的，并非依靠操作的優(yōu)化便能夠?qū)崿F(xiàn)突破的。
比色法試劑盒標(biāo)曲做不好怎么辦
今年三月的時候，老馬所在的實驗室迎來了一位剛畢業(yè)的新人。這位新人首次獨(dú)自開展操作那個涉及比色法的試劑盒，然而標(biāo)準(zhǔn)曲線做了整整三天都未能成功做出來。之后，老馬將這件事情當(dāng)作了一個具有典型性的案例加以復(fù)盤。
新人應(yīng)他要求，將操作的整個過程進(jìn)行了演示，之后經(jīng)查發(fā)現(xiàn)，問題存在于標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋那方面。新人采用的是序列稀釋這種方法，每一個試管，都是從上個試管里頭吸取溶液，而后再進(jìn)行稀釋，把溶液轉(zhuǎn)移到下一個試管的。該方法本身不存在什么問題，可是，若移液槍的精度達(dá)不到要求，或者溶液混勻得不夠徹底充分，那么誤差便會一級一級地逐漸增大直到放大。最終做出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線，R平方值連零點九都達(dá)不到。
老馬為新人改換了一種做法，采用同一個母液，分別去配制每個濃度點的標(biāo)準(zhǔn)品，這意味著，對于每個點的稀釋都是彼此獨(dú)立的，并不依賴前一個點，雖說稍微會耗費(fèi)一點試劑，不過誤差不會出現(xiàn)累積，重新進(jìn)行了一遍操作后，標(biāo)準(zhǔn)曲線的R平方值徑直達(dá)到了零點九九八。
他另外歸納出了一項小竅門，那就是，實施比色法試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線操作之際，最低濃度的那個點跟最高濃度的那一個點之間的倍數(shù)，較適宜的情形是不要超出一百倍這份數(shù)值范圍。要是動態(tài)范圍過于寬泛，處于中間位置的那些點便容易顯現(xiàn)出偏離的狀況。
比色法試劑盒干擾物質(zhì)怎么排除
四月時，老馬那支團(tuán)隊承接了一個水樣檢測項目，此項目頗為復(fù)雜。水樣的基質(zhì)狀況繁雜，其中含有多種不同的金屬離子以及有機(jī)質(zhì)。運(yùn)用比色法試劑盒進(jìn)行檢測完畢之后，所得到的結(jié)果顯著偏高，而且多次反復(fù)進(jìn)行檢測，其結(jié)果均呈現(xiàn)偏高態(tài)勢。
是他判斷為基質(zhì)干擾，比色法的原理乃是基于顯色反應(yīng)，倘若樣品當(dāng)中的其它成分也可以跟顯色劑發(fā)生反應(yīng)，又或者使反應(yīng)體系的pH值出現(xiàn)改變，便會產(chǎn)生假陽性，老馬那時做了兩組對照，一組是由純水配制而成的標(biāo)準(zhǔn)品，另一組是運(yùn)用樣品基質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)加入法），兩組的結(jié)果差異極為顯著，這證實了他的判斷。
他在查閱資料以后，于樣品前處理該環(huán)節(jié)增添了一步固相萃取操作進(jìn)而先將干擾物質(zhì)予以去除，隨后運(yùn)用比色法試劑盒展開測定，結(jié)果瞬間就恢復(fù)正常了。老馬后來在他們實驗室的內(nèi)部培訓(xùn)期間專門針對這件事情進(jìn)行了講述，要求所有人員在遭遇復(fù)雜基質(zhì)樣品之際，務(wù)必要率先開展基質(zhì)加標(biāo)回收實驗，在確認(rèn)不存在明顯干擾之后方可正式實施測試。
比色法試劑盒如何判斷試劑變質(zhì)
今年五月上旬，老馬在整理試劑冰箱時翻出一盒放置快一年的比色法試劑盒。其保質(zhì)期還有兩個月，然而他不敢直接使用。隨后他給我來電稱，這種狀況極為常見——試劑雖未過期，可顏色已然與新買的有所不同了。
他究竟是怎樣去判斷試劑是不是變質(zhì)的呢，方法實際上并非復(fù)雜。他會首先開展一次外觀檢查，正常的工作液理應(yīng)是澄清著透明的，要是出現(xiàn)沉淀、渾濁或者顏色顯著加深，大概率已然變質(zhì)了。要是外觀不存在問題，他會運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)品做一次單點驗證，去測一個已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，查看回收率是不是在百分之九十到百分之一百一十之間。
老馬講了另外一種更為嚴(yán)格的舉措：留存每一批次試劑盒初次使用時刻的標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)。在后續(xù)使用之際，要是標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率或者截距與歷史數(shù)據(jù)之間的偏差超出百分之十，就算質(zhì)控樣處于規(guī)定范圍當(dāng)中，他依舊會對這一批次的數(shù)據(jù)持有保留看法。這樣的做法盡管繁雜，然而對于有著高要求的項目而言是極為必要的沒錯。
比色法試劑盒哪個品牌性價比高
最后的時候聊起來，必然會有人質(zhì)問老馬，比色法試劑盒當(dāng)中哪個品牌具備較高性價比。老馬于實驗室工作長達(dá)八年時光，所使用過的品牌數(shù)目不少于十個。他的觀點是，并非僅僅去看單個價格，而是要計算綜合成本。
他列舉了一個事例，存在這樣一個品牌的試劑盒，其單價較為低廉，可是試劑的有效期限僅僅為六個月，并且在開封之后僅僅能夠存放兩周，他們所擁有的樣品數(shù)量并不多，往往一盒試劑直至過期都無法用完，經(jīng)過計算，實際上的成本反而要比另外一個有效期為一年、開封之后能夠穩(wěn)定存放兩個月的品牌更高。
還有一項關(guān)鍵成本是重測率，老馬曾使用過一款價格低廉的比色法試劑盒，各批次之間有較大波動，進(jìn)行質(zhì)量控制時的樣本常常超出標(biāo)準(zhǔn)范圍，頻繁需要整批重新檢測，重新檢測所耗費(fèi)的不光是試劑，還有時間方面的成本以及人力板塊的成本，隨后更換了穩(wěn)定性更佳的試劑盒，盡管單個單價提高了百分之三十，然而重測率從百分之十五下降到百分之三以下，綜合成本反倒有所降低。
老馬所提供的建議為，在挑選比色法試劑盒之際，向廠家索要若干批次的質(zhì)控報告，以此查看批次之間的差異究竟有多大。另外，詢問一下交貨的周期以及庫存的情況，切莫等到急需使用之時才發(fā)覺已經(jīng)斷貨了。
去年底起始至今年五月為止，老馬的這段經(jīng)歷，前前后后折騰了一小半年時間。起始于一個出現(xiàn)翻車狀況的項目，最終摸索出了一套具備實用性質(zhì)且可靠的方法論。他曾講過一句話，我對那句話印象頗為深刻，那句話內(nèi)容是：“做實驗這般事情，在許多情形下并非是技術(shù)存在不足，而是工具未能選妥當(dāng)。”。
那作為一種堪稱經(jīng)典的分析方法的比色法，其穩(wěn)定性與可靠性在極大程度上是取決于試劑盒自身的質(zhì)量以及選擇的。老馬曾經(jīng)踩過的坑，你有可能正在踩；他所找到的辦法，你或許能夠直接加以運(yùn)用。
要是你認(rèn)定這篇文章于你有益處，歡迎將其收藏起來，或者轉(zhuǎn)發(fā)給實驗室當(dāng)中同樣遭受比色法困擾的同事。同時也歡迎關(guān)注我的賬號，后續(xù)會持續(xù)不斷地分享更多實驗室工作里的實戰(zhàn)經(jīng)驗。
