朋友老張的困境：實(shí)驗(yàn)做得越多，失敗越多
前段時(shí)間, 我與在大學(xué)做科研的朋友老張一起吃飯, 他滿臉愁容地告訴我, 這幾天快被實(shí)驗(yàn)弄瘋了, 越做越感覺不正常。老張搞分子生物學(xué), 手上有好幾個(gè)項(xiàng)目都在檢測環(huán)節(jié)遇到阻礙。每次跑完數(shù)據(jù), 要么背景高得出奇, 要么重復(fù)性差得令人抓狂。他對我說, 明明是依照標(biāo)準(zhǔn)流程操作的, 為何結(jié)果就是不對呢?
其實(shí), 好多從事做實(shí)驗(yàn)的人都存在著類似的狀況。特別是在涉及微量樣品這個(gè)方面的時(shí)候, 那些傳統(tǒng)的檢測手法, 要么就是靈敏度達(dá)不到要求, 要么操作起來太過繁雜瑣碎, 只要稍微一不小心, 那就全部白費(fèi)力氣。老張那個(gè)時(shí)候用的居然還是自己配置的試劑, 從進(jìn)行稱量開始, 再到溶解進(jìn)而調(diào)整pH值, 每一個(gè)步驟都謹(jǐn)慎小心得很, 不過實(shí)驗(yàn)所得到的數(shù)據(jù), 卻依舊好似過山車那般一會兒高一會兒低不穩(wěn)定。
為什么微量法檢測試劑盒能解決他的問題？
實(shí)驗(yàn)的黃金定律：穩(wěn)定壓倒一切
那段時(shí)間, 老張幾乎每日都在重復(fù)同一個(gè)實(shí)驗(yàn), 該實(shí)驗(yàn)?zāi)耸菣z測細(xì)胞裂解液里某一種蛋白的濃度, 他所使用的是一套由自己配制的ELISA試劑, 底物源自自己購買, 抗體由自己進(jìn)行稀釋, 洗液同樣是自己配制而成, 聽起來似乎并無問題, 然而實(shí)際情形卻是, 不同批次所配出來的試劑, 其活性總會存在差異。
曾有一回, 他于周一所配制的底物, 與周三所配制的底物, 于同等濃度的標(biāo)準(zhǔn)品情形下, 其吸光度值相差了將近百分之四十。這般波動(dòng)徑直致使他三天的工作全然作廢。老張當(dāng)時(shí)憤怒得拍桌子, 言道: “若再如此這般地干下去, 我的論文便別想發(fā)表了。
之后, 我同他講道, 你何不去嘗試一下微量法檢測試劑盒。起初, 他還存有遲疑, 言道: “購買試劑盒是何等昂貴, 自行配置的較為便宜些?！钡蚪?jīng)歷了這一回的失敗, 他狠下心購置了一盒。
操作復(fù)雜？不存在的
有一回, 老張頭一回采用微量法檢測試劑盒之際, 簡直就不太敢去相信操作居然能夠這般容易。所有的試劑全都是現(xiàn)成的, 只需要依照說明書里所標(biāo)示的各步驟分別進(jìn)行加樣、孵育、洗滌以及讀板這一系列操作。他甚至于都不需要親自去計(jì)算濃度, 這本試劑盒自身配備了標(biāo)準(zhǔn)品, 只消直接做出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線便能夠得出相應(yīng)的結(jié)果。
在最為關(guān)鍵的一點(diǎn)上, 往昔自己去配制試劑之時(shí), 每一回都得是現(xiàn)配現(xiàn)用才行, 要是放置的時(shí)間久了些, 那活性便會有所下降。然而試劑盒當(dāng)中的試劑是經(jīng)過了凍干或者穩(wěn)定化這類處理的, 在打開蓋子之后, 于一定的條件之下能夠維持很長時(shí)間的活性。老張經(jīng)過一番計(jì)算得出, 一盒試劑盒能夠用來做幾十次實(shí)驗(yàn), 算下來單次實(shí)驗(yàn)的成本并沒有比自己去配制高太多, 可是所節(jié)省下來的時(shí)間以及精力卻是無可估值的, 貴重得很呢。
從數(shù)據(jù)翻車到數(shù)據(jù)漂亮：老張的轉(zhuǎn)折點(diǎn)
第一次實(shí)驗(yàn)就讓他震驚了
老張做的第一批樣品, 是用微量法檢測試劑盒弄出來的, 數(shù)據(jù)冒出來之際, 他自己都沒法相信。同一個(gè)樣品, 重復(fù)了三回。CV值, 也就是變異系數(shù), 僅僅只有2.3%。這到底是啥概念呢? 先前他自己配制試劑時(shí), 同樣的那個(gè)樣品, 重復(fù)三次, CV值常常會跑到10%以上。
他立刻將先前那些宣告作壞之樣品再度進(jìn)行了一遍操作。隨后發(fā)覺，諸多往昔認(rèn)定為“樣品存有問題”的數(shù)據(jù), 實(shí)則乃試劑方面的問題。運(yùn)用試劑盒予以重新檢測之后, 數(shù)據(jù)的一致性相當(dāng)出色, 并且靈敏度相較于自行配制的提升了起碼一個(gè)數(shù)量級。
微量樣品也能精準(zhǔn)檢測
就在老張所負(fù)責(zé)開展的項(xiàng)目當(dāng)中, 常常得運(yùn)用到數(shù)量極其稀少微量的樣品, 像那種單個(gè)細(xì)胞的裂解液, 又或者是經(jīng)過稀釋處理之后的核酸提取物。以往要是采用常規(guī)的方法, 這些樣品通常會出現(xiàn)檢測不到信號的情況, 要不然就是信號微弱程度太過, 根本沒有辦法去進(jìn)行定量。
微量法檢測試劑盒具備優(yōu)勢體現(xiàn)在, 其是專門針對小體積、低濃度的樣品予以優(yōu)化的結(jié)果。老張講, 他后續(xù)所用試劑盒檢測過體積僅5微升的樣品, 并且依舊能夠獲取清晰的信號。這在以往是從完全不敢去設(shè)想的。
選對試劑盒，實(shí)驗(yàn)少走彎路
怎么判斷試劑盒好不好？
老張?jiān)谑褂眠^一回之后, 便徹徹底底地變成了試劑盒的忠實(shí)使用者。然而他倒是也向我發(fā)出了提醒, 并非是所有的試劑盒都是好用的。他歸納總結(jié)出了幾條用于判斷的標(biāo)準(zhǔn)呢:
瞧那批次的穩(wěn)定性情況, 真正稱得上優(yōu)質(zhì)的微量法檢測試劑盒, 不同批次相互之間的性能差值理應(yīng)處于5%以內(nèi), 老張隨后更換了一個(gè)品牌種類的試劑盒, 接連使用了三個(gè)批次, 標(biāo)準(zhǔn)曲線近乎重合。
瞅瞅操作說明書瞧瞧, 沒問題的試劑盒之說明書注定是寫成要特別詳盡的, 從樣本先前處理開始一直到讀數(shù)設(shè)置這塊兒, 每一個(gè)步驟都是有著明確指引的, 要是說明書說法含混模糊不清楚的話, 這樣大概率產(chǎn)品的那品控也是處于一般狀況的。
查看與之配套的標(biāo)準(zhǔn)品, 標(biāo)準(zhǔn)品所具備的穩(wěn)定性以及純度, 直接對定量結(jié)果的準(zhǔn)確性起到?jīng)Q定性作用, 老張講, 他先前使用過一個(gè)價(jià)格較為低廉的品牌, 該標(biāo)準(zhǔn)品使用了幾次之后就發(fā)生了降解現(xiàn)象, 后來更換為大品牌的產(chǎn)品，此問題便再未出現(xiàn)過。
別讓試劑成為實(shí)驗(yàn)的瓶頸
老張如今時(shí)常跟實(shí)驗(yàn)室里的新人講, 別在小錢方面斤斤計(jì)較, 試劑可是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵所在。他曾親眼目睹一個(gè)師弟為了節(jié)省幾百塊錢, 始終使用自己配制的試劑, 結(jié)果連續(xù)兩個(gè)月的數(shù)據(jù)全都是無效的, 最終耗費(fèi)了更多金錢與時(shí)間去購置試劑盒重新開展實(shí)驗(yàn)。
擁有微量法檢測功能的試劑盒, 盡管乍一瞧其單個(gè)售價(jià)頗高, 然而要是將因它所帶來的穩(wěn)定性、重復(fù)性以及節(jié)省下來的時(shí)間成本一并算進(jìn)去的話, 實(shí)際上它的性價(jià)比是極為超卓的。特別是針對那些從事科研工作的人士而言, 在諸般事物當(dāng)中, 時(shí)間可是比其他任何東西都要來得珍貴的。一款值得信賴的試劑盒, 能夠促使你把自身的精力投放于對實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的思索上, 而并非費(fèi)勁跟試劑進(jìn)行無謂的較量。
寫在最后：解決問題的捷徑
老張近來的項(xiàng)目推進(jìn)得極為順?biāo)欤脦灼撐牡臄?shù)據(jù)均已整理妥當(dāng), 正準(zhǔn)備拿去投稿。他還特地發(fā)消息告知我: “幸虧當(dāng)初聽從了你的提議, 置換了微量法檢測試劑盒呢。不然此刻必定仍在原地徘徊不前?！?。
經(jīng)由此件事情, 我亦領(lǐng)悟了一個(gè)道理, 諸多時(shí)刻, 實(shí)驗(yàn)未能做出并非是你的過失, 而是工具所導(dǎo)致的問題。恰當(dāng)?shù)墓ぞ卟坏軌蛱嵘? 還能夠使你對結(jié)果更具信心。要是你也正為檢測數(shù)據(jù)不穩(wěn)定、靈敏度欠缺而苦惱, 不妨試試看微量的檢測試劑盒, 說不定這便是你所需的那個(gè)解決辦法。
