這篇文章能幫你解決什么？
搞科研的人都清楚得知, ELISA試劑盒此物, 瞅著簡(jiǎn)易, 運(yùn)用起來(lái)卻每每使人抓狂。背景偏高, 重復(fù)性欠佳, 批次不穩(wěn)定, 這些狀況隨便遇上其中一個(gè), 皆足以致使你耗費(fèi)數(shù)周所獲的數(shù)據(jù)報(bào)廢。今日我就憑借我一位朋友的自身經(jīng)歷, 給你講講明白, 究竟怎樣挑選到可靠的科研ELISA試劑盒, 以使你的實(shí)驗(yàn)減少走彎路。
上個(gè)月, 于北京中關(guān)村的一處咖啡館之內(nèi), 我見(jiàn)到了故人張磊。他在職于中科院某一研究所進(jìn)行免疫學(xué)范疇的相關(guān)研究, 已然從業(yè)將近六年時(shí)間。甫一落座, 他便對(duì)著我傾訴起了諸多苦衷。
張磊講, 他們課題組與去年承接了一項(xiàng)關(guān)乎炎癥因子的課題, 在前期的時(shí)候, 針對(duì)文獻(xiàn)展開調(diào)研, 以及進(jìn)行樣本收集, 這些事情都做得頗具樣子, 然而, 最終卻在檢測(cè)這個(gè)環(huán)節(jié)遭遇了困阻。他們所使用的是某一品牌的科研ELISA試劑盒, 在最初的兩批數(shù)據(jù)方面, 還算能夠說(shuō)得過(guò)去, 可是, 當(dāng)更換到第三批批號(hào)之后, 標(biāo)準(zhǔn)曲線竟然直接出現(xiàn)了飄移的狀況, 重復(fù)孔的CV值一下子飆升到了百分之二十以上。
張磊端起咖啡, 疾猛喝了一口, 說(shuō)道, “我當(dāng)時(shí)整個(gè)人均已快要呈爆炸狀態(tài)了。”, “你可知道那種感受嗎? 樣本已然處理妥善了, 時(shí)間窗口僅有那么幾天, 倘若試劑盒不具備可行性, 整個(gè)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃皆需延后推進(jìn)?！?。
科研ELISA試劑盒到底該怎么挑？
當(dāng)時(shí)處于張磊那段時(shí)期, 他差不多把實(shí)驗(yàn)室當(dāng)中能夠去詢問(wèn)的人員都逐一詢問(wèn)了個(gè)遍。存在這樣的情況, 有的師兄表明大品牌具備穩(wěn)定性, 即便價(jià)格貴一些那也是值得的；還有的師弟進(jìn)行推薦, 推薦小眾牌子, 聲稱性價(jià)比是比較高的。各種各樣的說(shuō)法都存在著, 張磊在聽(tīng)的過(guò)程中是越來(lái)越感到迷糊的。
稍后他讓內(nèi)心平靜下來(lái), 再次對(duì)個(gè)人所需進(jìn)行了整理梳順。他察覺(jué)到, 挑選科研 ELISA 試劑盒時(shí), 不能僅僅依據(jù)品牌或者價(jià)格, 而應(yīng)當(dāng)從實(shí)際的應(yīng)用場(chǎng)景著手。比如說(shuō), 他所從事的炎癥因子檢測(cè), 樣本的類型為血清以及細(xì)胞上清, 基礎(chǔ)的干擾原本就較為嚴(yán)重, 要是試劑盒的抗體配對(duì)欠佳，特異性不足, 背景值就會(huì)高到極其離譜的程度。
他專門去查閱了資料, 發(fā)覺(jué)好多科研人員陷入困境, 皆是由于未曾留意試劑盒的交叉反應(yīng)。部分試劑盒聲稱檢測(cè)范圍極為廣泛, 然而在實(shí)際使用之時(shí), 只要與同家族的蛋白出現(xiàn)一次交叉, 數(shù)據(jù)便會(huì)全然混亂。
朋友折騰了三個(gè)月才找到的選型方法
有個(gè)叫張磊的人, 做事情特別愛(ài)較真。他把在市場(chǎng)上所能見(jiàn)到的五家處于主流地位受人注目的品牌所生產(chǎn)的科研ELISA試劑盒, 都購(gòu)買了小包裝形式的若干回來(lái)用以進(jìn)行相互之間的對(duì)比。然后他采用同一批標(biāo)準(zhǔn)品, 由同一個(gè)操作人員來(lái)動(dòng)手操作, 并且在同一天于機(jī)器上進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作, 然而得出來(lái)的結(jié)果差異居然大到了令人十分訝異震驚的程度。
存在兩個(gè)品牌, 其標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性度糟糕透頂, R平方值居然連0.98都未曾達(dá)到。另外還有一個(gè)品牌, 說(shuō)明書標(biāo)明的靈敏度為1 pg/mL可是實(shí)際上進(jìn)行測(cè)量之時(shí), 最低檢測(cè)限僅僅只能達(dá)到5 pg/mL。僅有一家, 其標(biāo)曲穩(wěn)定得很, 重復(fù)孔之間形成的差異被控制于百分之五以內(nèi), 妥妥的。
有個(gè)人叫張磊, 他跟我講了一件事, 內(nèi)容是關(guān)于一家品牌, 那是他最終確定選擇的, 此品牌來(lái)自南京, 是一家專門從事免疫檢測(cè)試劑制作的公司。這家公司的技術(shù)支撐的專業(yè)性非常突出, 表現(xiàn)為, 它不但幫張磊做了樣本預(yù)實(shí)驗(yàn), 而且依據(jù)張磊的樣本類型對(duì)稀釋比例進(jìn)行了調(diào)整。
“你可曉得？他們針對(duì)樣本當(dāng)中的溶血以及脂血干擾, 都為我展開了分析?！睆埨谥v這番話語(yǔ)時(shí), 眼睛里閃耀著光芒, “我當(dāng)時(shí)便由衷覺(jué)得, 這般才堪稱專業(yè)?！?。
從實(shí)驗(yàn)翻車到數(shù)據(jù)穩(wěn)定，他用了這幾招
張磊后來(lái)總結(jié)了一套自己的方法論，現(xiàn)在他們整個(gè)課題組都在用。
拿到試劑盒時(shí), 先別去看說(shuō)明書上面那些參數(shù)有多好看, 而是直接去做標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證。按他的要求, 自己每次面對(duì)每個(gè)試劑盒都必然要跑三條標(biāo)準(zhǔn)曲線, 之后取平均值, 要是R平方低于0.99的那就直接退掉。
樣本預(yù)實(shí)驗(yàn)是絕對(duì)不可以省略的, 他對(duì)于每一批新抵達(dá)的科研ELISA試劑盒, 都會(huì)首先選用三至五個(gè)擁有已知濃度的樣本去開展預(yù)實(shí)驗(yàn), 以此查看回收率是否處于合理的范圍之中, 針對(duì)回收率低于百分之八十或者高于百分之一百二十的情況, 他必將直接與廠家技術(shù)團(tuán)隊(duì)取得聯(lián)系。
要留意批次之間的穩(wěn)定性這一情況。張磊于去年十一月開展了一個(gè)規(guī)模較大的實(shí)驗(yàn), 該實(shí)驗(yàn)前前后后運(yùn)用了三個(gè)批次不同的試劑盒。他在每一個(gè)批次當(dāng)中, 都留存了一管相同的用于質(zhì)量控制的樣本, 目的是借助其來(lái)監(jiān)測(cè)批次之間所存在的差異。結(jié)果顯示, 他所選用的那個(gè)品牌, 三個(gè)批次的質(zhì)量控制數(shù)值波動(dòng)幅度均處于百分之五以內(nèi)。
“這般程度著實(shí)至關(guān)重要。”張磊著重表明, “假設(shè)你所開展的是長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)追蹤的研究, 然而批次之間呈現(xiàn)出不穩(wěn)定的態(tài)勢(shì), 那么數(shù)據(jù)從根本上而言根本無(wú)法進(jìn)行縱向比較。”。
真正的好產(chǎn)品是幫你省時(shí)間的
這個(gè)三月, 張磊的論文終于是投出去了的狀態(tài)。他跟本人講, 此次實(shí)驗(yàn)得以順利實(shí)現(xiàn)推進(jìn), 最大的立功者是那款科研方面的ELISA試劑盒。
原先使用別的品牌之際, 他光是處理那些異常的數(shù)據(jù), 就得耗費(fèi)兩天的時(shí)間。當(dāng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線維持穩(wěn)定, 背景值處于較低水平, 樣本回收率良好, 基本一次運(yùn)行完畢便能夠直接展開分析。他的用時(shí)一下子被解放出來(lái), 能夠用以開展更具價(jià)值的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
張磊感嘆, 做科研之事的人, 最具價(jià)值的便是時(shí)間, 試劑盒節(jié)省下來(lái)的每一分鐘, 皆能夠用于思考以及探索之上。
當(dāng)他現(xiàn)如今向師弟師妹們?nèi)ネ扑]試劑盒之際, 其第一句話始終都會(huì)是: 不要僅僅只去看那價(jià)格以及品牌, 要首先去看技術(shù)團(tuán)隊(duì)的響應(yīng)的速度以及試劑盒的批次的穩(wěn)定性。這兩個(gè)點(diǎn), 才是切實(shí)真正確立你實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵所在。
寫在最后
張磊講完故事了, 可我曉得, 好多搞科研的朋友或許仍在遭遇相似的困境。面對(duì)市面上品類繁多的科研ELISA試劑盒, 別急, 別盲目跟風(fēng)。花些時(shí)間做驗(yàn)證, 添些耐心和技術(shù)團(tuán)隊(duì)交流, 你肯定能尋得那個(gè)最適配你實(shí)驗(yàn)體系的產(chǎn)品。
做實(shí)驗(yàn)這個(gè)事情, 絕非越快就越好, 而是要穩(wěn)步之中尋求進(jìn)展。挑選出一個(gè)靠得住的試劑盒, 便是給自身的研究增添了雙重保障。
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