上一個(gè)月, 我于北京中關(guān)村的一家生物科技公司的樓下, 等到了那位多年未曾相見的老朋友張偉。他身著一件洗得略微發(fā)白的實(shí)驗(yàn)服, 手里拎著兩個(gè)手提箱, 剛剛從高鐵站乘坐出租車趕來。他乃是國內(nèi)某所知名高校生命科學(xué)學(xué)院的副研究員, 其研究方向?yàn)槟[瘤標(biāo)志物檢測。我們尋覓到一家安靜的咖啡館并坐下, 他一邊揉著太陽穴, 一邊發(fā)出感慨: “這幾年, 單單在PCR試劑盒上面所吃的虧, 足夠用來撰寫一本書了。”。
2019年起, 張偉所在的實(shí)驗(yàn)室承接國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目，主要致力于循環(huán)腫瘤DNA的早期篩查工作。聽起來頗具高端之感, 然而他表示, 實(shí)際著手做實(shí)驗(yàn)后才發(fā)覺, 科研PCR試劑盒的挑選, 直接左右著實(shí)驗(yàn)的成功與否。他向我講述了一則案例: 2022年春季, 他們團(tuán)隊(duì)接到一項(xiàng)緊急任務(wù), 要求在兩個(gè)月內(nèi)完成一批臨床樣本的驗(yàn)證。為了加快進(jìn)度, 他購置了一批某品牌的科研PCR試劑盒, 該試劑盒價(jià)格低廉, 發(fā)貨速度也很快。第一次進(jìn)行qPCR時(shí), 結(jié)果呈現(xiàn)出的擴(kuò)增曲線雜亂無章, 熔解曲線出現(xiàn)了并非特異性的峰, CT值的波動(dòng)幅度大到離譜, 他當(dāng)時(shí)就愣住發(fā)呆不知所措了, 幾十個(gè)樣本, 白白耗費(fèi)了三天時(shí)間去做。
在張偉講述時(shí), 他的眼神里帶著當(dāng)時(shí)的焦躁, 說道: “你清楚嗎? 機(jī)器發(fā)出嗡嗡聲響, 屏幕上的曲線卻始終無法成形, 而你站在一旁, 手心布滿了汗水?！彪S后, 因情況如此；他請了隔壁實(shí)驗(yàn)室一位從事PCR實(shí)驗(yàn)十年時(shí)間的老師傅前來協(xié)助排查。那位老師傅看了一眼試劑盒的品牌, 便徑直發(fā)話道: “這類做科研用的PCR試劑盒，其引物二聚體出現(xiàn)的概率過高, 對于你們這種涉及多靶點(diǎn)檢測的情形并不適宜?！?。
吸取那次教訓(xùn)后, 張偉著手認(rèn)真鉆研科研PCR試劑盒的選型事宜, 他告知我, 挑選試劑盒時(shí), 價(jià)格并非唯一考量因素, 品牌名氣也絕非首要抉擇標(biāo)準(zhǔn), 關(guān)鍵得看重三個(gè)要點(diǎn), 其一為酶的熱啟動(dòng)特性, 此乃確保擴(kuò)增特異性的重中之重；其二是緩沖液的緩沖性能, 它對多重PCR的穩(wěn)定性有著直接影響；其三是試劑盒針對低拷貝模板的靈敏程度, 尤其在進(jìn)行液體活檢時(shí), 樣本里的靶標(biāo)或許僅有寥寥幾個(gè)拷貝, 倘若試劑盒靈敏度不足, 最終就會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
2023年的夏天, 張偉更換了一款全新的科研PCR試劑盒, 它屬于某國際大牌的“高靈敏度版”, 其價(jià)格貴了整整一倍, 然而效果著實(shí)立竿見影。他向我分享了一組數(shù)據(jù): 在使用老試劑盒的時(shí)候, 他們的陽性檢出率僅僅只有78%, 更換新試劑盒之后, 在三個(gè)月之內(nèi)連續(xù)進(jìn)行了三次驗(yàn)證, 陽性檢出率穩(wěn)定在了94%以上。這樣的差距，于科研論文當(dāng)中, 或許就是“有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義”與“沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義”的差異。
張偉還向我發(fā)出提醒, 科研PCR試劑盒那批次的穩(wěn)定性特別容易遭受到忽視。他在去年的時(shí)候就踩過這個(gè)坑。在2024年1月經(jīng)由, 他們團(tuán)隊(duì)著手去做大樣本驗(yàn)證, 前前后后運(yùn)用了三批試劑盒, 結(jié)果第一批跟第二批的擴(kuò)增效率相差了將近15%。要是不是他做了標(biāo)準(zhǔn)曲線對比, 根本就發(fā)現(xiàn)不了。后來他有了習(xí)慣: 每次到貨的科研PCR試劑盒, 先進(jìn)行盲測三份已知樣本, 確認(rèn)CT值偏差處于0.5以內(nèi), 才敢于用到正式實(shí)驗(yàn)當(dāng)中。
你琢磨琢磨, 對于一篇SCI論文而言, 要是審稿人詢問你怎樣確保重復(fù)性, 你定然不能回應(yīng)說“靠運(yùn)氣唄”, 張偉微微含笑, 抿了一口已然變涼的咖啡。他講道, 現(xiàn)今實(shí)驗(yàn)室中新來的研究生, 首要之事便是被帶去學(xué)習(xí)怎樣驗(yàn)證科研PCR試劑盒。從模板稀釋開始, 歷經(jīng)引物設(shè)計(jì)階段, 再到反應(yīng)體系優(yōu)化工作, 每一個(gè)步驟都得親自去操作一番, 而非徑直依照說明書行事。這是由于說明書里所給出的推薦條件, 通常是在理想樣本上予以優(yōu)化處理的, 真實(shí)樣本當(dāng)中的抑制劑、鹽離子濃度以及核酸完整性那般情況, 均會(huì)對試劑的性能產(chǎn)生影響。
今年3月, 張偉于參加上海某次學(xué)術(shù)會(huì)議之際, 碰到了老試劑盒廠家的銷售代表。彼時(shí)對方遞來一張名片, 宣稱其科研PCR試劑盒已然升級為新一代產(chǎn)品, 熱啟動(dòng)酶的半衰期為之延長, 抗抑制能力亦見提升。張偉當(dāng)著對方之面講道: “我有可能會(huì)購買一盒加以嘗試, 不過此次我會(huì)先行開展驗(yàn)證工作, 而不會(huì)徑直投入大型實(shí)驗(yàn)進(jìn)行操作。你們產(chǎn)品究竟好不好, 由數(shù)據(jù)來判定。”那個(gè)銷售代表先是一怔, 轉(zhuǎn)瞬之后點(diǎn)頭同意。
在咖啡館中坐著, 我望向窗外一片車水馬龍的中關(guān)村大街, 忽地領(lǐng)會(huì)了張偉所述的那句“科研試劑盒并非耗材, 乃是工具”究竟是何意。優(yōu)質(zhì)的科研PCR試劑盒, 并非使你節(jié)省錢款的, 而是讓你節(jié)省時(shí)間的。然而時(shí)間, 才是實(shí)驗(yàn)室里最為昂貴之物。要是你此刻正為挑選試劑盒而犯愁, 不妨牢記張偉的這番言論: “先實(shí)施驗(yàn)證, 再度進(jìn)行批量；先確保穩(wěn)定, 再做到靈敏。別急于去跑樣本, 先將試劑盒弄明白?！?。
