為什么要讀完這篇文章
也許你正為腫瘤細胞株相關(guān)實驗而發(fā)愁, 不清楚該從哪兒尋覓靠譜的細胞株, 又或者購買后養(yǎng)不活, 實驗數(shù)據(jù)始終不穩(wěn)定。這篇文章講述的是我朋友老趙的真實經(jīng)歷, 他從遭遇困境到脫離困境, 每一步都值得正在從事腫瘤研究的你借鑒, 可供你參考。
在生物公司工作之際, 我結(jié)識了老趙這位朋友, 他于一家剛創(chuàng)立的生物科技企業(yè)擔任研發(fā)主管, 工作職責主要是開展腫瘤藥物的體外藥效評價, 具體而言, 其每日都要與各類腫瘤細胞株相互接觸, 借助它們?nèi)z測候選藥物產(chǎn)生的效果。
腫瘤細胞株選不對，實驗白費
趙國剛擔任項目負責人之初時, 那所公司的預(yù)算處于緊張受限狀況, 為了節(jié)省開支費用, 他于國內(nèi)一些規(guī)模較小的平臺購置了若干價格低廉的腫瘤細胞株。但后來第一批進行的實驗卻遭遇了問題, 具體表現(xiàn)為細胞生長速度緩慢, 呈現(xiàn)出來的狀態(tài)欠佳, 所做出的IC50曲線與文獻當中展示的情況不相匹配不能符合。
老趙后來跟我說, 那時他真是頭大, 老板天天催著要進度, 而實驗取得的數(shù)據(jù)怎么都無法說出個所以然來。他耗費了整整兩周時間進行復(fù)盤, 才察覺到在細胞株的源頭鑒定方面出現(xiàn)了問題。
買細胞株之前要先確認什么
在2023年7月的時候, 老趙于杭州參與了一個生物醫(yī)藥展會, 跟幾個同行進行了交流, 這才知曉選擇腫瘤細胞株存在相應(yīng)門道。他歸納了幾點, 其一, 要查看供應(yīng)商是不是提供STR鑒定報告, 這可是確認細胞株身份的關(guān)鍵標準；其二, 細胞株的代次越低越為適宜, 傳繼次數(shù)增多容易出現(xiàn)基因漂變；其三, 最好挑選具備支原體檢測陰性報告的相關(guān)產(chǎn)品。
老趙表示, 以前他覺得只要是腫瘤細胞株, 隨意買一個便能夠使用, 實際上相差甚遠。后來, 他更換成了一家具備正規(guī)資質(zhì)的供應(yīng)商, 盡管價格貴了些許, 然而收到的細胞株附帶完整的鑒定報告, 使用起來內(nèi)心踏實。
腫瘤細胞株培養(yǎng)失敗的常見原因
原本以為換了一批細胞株后就不會有問題了, 可老趙沒想到還是出狀況了, 這不, 在2023年9月的一個下午, 他把新到的HepG2細胞株從液氮里取出來進行復(fù)蘇操作, 然而兩天之后查看時, 卻發(fā)現(xiàn)細胞貼壁率竟然不到30%。
老趙著急起來, 撥打了電話給供應(yīng)商那邊的技術(shù)支撐, 對方朝著老趙詢問了一連串的問題: 培養(yǎng)基所采用的是什么種類? 血清批次是否具備穩(wěn)定性? 培養(yǎng)箱的CO?濃度以及溫度有沒有校準過? 老趙開展了逐一檢查, 發(fā)覺培養(yǎng)箱的溫度探頭出現(xiàn)了1.5℃的偏差。
為他的細胞株復(fù)蘇失敗的便是這1.5℃的溫差 , 老趙后來養(yǎng)成了習慣 , 每次做實驗之前 , 先用紅外溫度計測量一下培養(yǎng)箱的實際溫度。
腫瘤細胞株實驗數(shù)據(jù)為什么總是不穩(wěn)定
2024年1月, 老趙所負責的項目步入關(guān)鍵時期, 要借助腫瘤細胞株開展一組濃度梯度實驗, 他依規(guī)嚴格依照標準流程予以操作, 然而連續(xù)三次進行重復(fù)實驗, 其結(jié)果波動幅度極大, 變異系數(shù)超出了20%。
老趙開始疑惑, 究竟是不是細胞株自身存在問題呢。他查閱了數(shù)目眾多的文獻, 還向行業(yè)內(nèi)的前輩進行了咨詢, 最終發(fā)覺了一個極易被忽視的因素, 那就是細胞株的融合度對于實驗結(jié)果的影響是極其重大的。同一腫瘤細胞株, 在處于80%融合度的時候加藥, 以及在處于95%融合度的時候加藥, 細胞對于藥物的響應(yīng)呈現(xiàn)出全然不一樣的情況。
那個時候之后, 我每一次進行鋪板時, 都對細胞密度予以嚴格把控, 保證每一個孔當中細胞的數(shù)量達成一致。老趙講道, 在這個細節(jié)得以改進以后, 他的數(shù)據(jù)重復(fù)性一下子就提升了。
腫瘤細胞株實驗中的污染問題怎么解決
弄腫瘤細胞株相關(guān)試驗, 最擔憂的便是出現(xiàn)污染情況。老趙所在的公司并非那種無菌狀態(tài)的車間, 實驗室的條件存在一定限制, 在2024年4月這個時間點, 他碰到了最為棘手的狀況——有一批細胞株遭受了真菌的污染。
老趙在那段幾乎令其崩潰的時間里, 前前后后排查了一個星期, 他把實驗室里所有的耗材換了一遍, 又把所有的試劑換了一遍, 還把所有的培養(yǎng)基換了一遍, 甚至連通風管道都找人清理了, 最后發(fā)現(xiàn)罪魁禍首是一個同事經(jīng)常用的移液器吸頭盒，該吸頭盒蓋子沒蓋緊, 致使吸頭被灰塵污染了。
老趙如今在每次做實驗之前, 無論自己本身有多忙碌, 都會先去查看一下培養(yǎng)箱當中的水盤是否添加了抑菌劑, 還要確認培養(yǎng)瓶的瓶蓋有沒有擰緊。他講道, 養(yǎng)育細胞株和養(yǎng)育孩子是一樣的情況, 絲毫都不能偷懶。
腫瘤細胞株實驗中的關(guān)鍵時間節(jié)點
2024年6月, 老趙接手了一個新項目, 該項目需要用三株不同的腫瘤細胞株來做聯(lián)合用藥實驗, 這次他準備得十分充分, 從訂購細胞株開始直至正式實驗, 每一步所經(jīng)歷的詳細時間他都做了記錄。
細胞株到貨之后的頭一件事情, 并非徑直去做實驗, 而是先要進行一部分擴增, 將其凍結(jié)儲存起來當作種子細胞。老趙講, 一棵腫瘤細胞株拿到手里以后, 在下一述三代之內(nèi)達成驗證實驗, 一旦確定沒有問題, 就趕忙分開包裝進行凍結(jié)儲存, 防止后續(xù)傳代次數(shù)過多致使細胞特性發(fā)生變動。
對于很多新人而言, 他們并不清楚, 會認為細胞株所要飼養(yǎng)的數(shù)量越多便越好, 然而實際上, 當傳代次數(shù)超過15代以后, 眾多的表型就會發(fā)生改變。老趙所擁有的經(jīng)驗是, 在每一次進行實驗的時候, 都會選用低代次的細胞株, 寧愿花費更多的時間去進行擴增, 也絕對不會使用高代次的細胞株湊合著用。
腫瘤細胞株實驗的長期管理經(jīng)驗
直到2024年9月之時, 老趙已然積攢了差不多一年的腫瘤細胞株方面的實驗經(jīng)驗, 他制作出了一個實驗管理表格, 該表格當中詳盡記錄著每一株細胞的來源于何處、其代數(shù)是多少、復(fù)蘇的具體日期是什么時候、傳代的次數(shù)究竟有多少、每一次實驗所呈現(xiàn)出的結(jié)果如何。
“此刻我掌上掌控著十幾株源于各異之處的腫瘤細胞株, 而對于每一株, 均構(gòu)建了獨立的臺賬?！崩馅w講道, 如此行事所具備的益處在于, 一旦某一細胞株的數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出異常狀況, 他便能夠即刻追根溯源, 明確問題究竟出在哪個具體環(huán)節(jié)。
當時老趙跟我講, 他當下實驗成功的概率相較于之前提升了不少, 而且老板對他愈發(fā)信賴有加。在二零二五年春節(jié)來臨之前, 他們那兒有一款備選藥物邁進了進行IND申報的階段, 而老趙所負責的體外藥效方面的數(shù)據(jù)就成為了支撐申報材料的關(guān)鍵部分。
腫瘤細胞株實驗中的避坑要點
回顧老趙這一年多的經(jīng)歷，我總結(jié)了幾點對你有用的東西：
在挑選腫瘤細胞株之際, 別單單只瞅價格, 得去看供應(yīng)商有沒有給出STR鑒定報告, 以及支原體檢測報告, 這可是最為基礎(chǔ)的保障呀！
細胞株拿到手之后, 先開展一回快速驗證, 去確認細胞形態(tài)以及生長特性與論文描述是相符的, 之后再進行大規(guī)模的擴增以及凍存。
于每次開展實驗之前, 對培養(yǎng)箱、培養(yǎng)基以及耗材的狀態(tài)予以檢查, 切莫讓微小的細節(jié)致使你耗費幾周時間所進行的工作遭受破壞。
對每一株細胞的傳代次數(shù)予以記錄, 同時記錄關(guān)鍵實驗參數(shù), 進而建立起屬于自己的細胞株管理檔案。
現(xiàn)在, 老趙時不時的仍舊會跟我開開玩笑, 講他往昔走過了那么多的曲折道路, 全都是源于對腫瘤細胞株欠缺足夠的認識。然而, 恰恰是這些曾經(jīng)經(jīng)歷過的挫折, 促使他轉(zhuǎn)變成了名副其實的專家。
要是你同樣在開展腫瘤細胞株關(guān)聯(lián)的研究, 期望老趙親身經(jīng)歷能夠助你減少一些不必要的曲折路程。實驗不存在便捷之道, 然而有些容易犯錯誤的地方, 絕對能夠避免。
