植酸(Saponin )含量試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
植酸又稱肌酸、環(huán)己六醇六全-二氫磷酸鹽,它主要存在于植物的種子、根干和莖中,其中以豆科植物的種子、谷物的麩皮和胚芽中含量最高。植酸作為螯合劑、抗氧化劑、保鮮劑、水的軟化劑、發(fā)酵促進劑、金屬防腐蝕劑等,廣泛應用于食品、醫(yī)藥、油漆涂料、日用化工、金屬加工、紡織工業(yè)、塑料工業(yè)及高分子工業(yè)等行業(yè)領域。
測定原理:
磺基水楊酸-氯化鐵溶液顯紫紅色,在500nm下有最大吸光值。在pH6.0-6.5的環(huán)境下,植酸和鐵離子結合使溶液顏色變淡,測定吸光度的降低來檢測植酸含量。
所需的儀器和用品:
酶標儀、烘箱、水浴鍋、可調式移液器、96孔板、金屬震蕩儀、蒸餾水
試劑的組成和配制:
試劑一:100ml×1瓶,4℃保存;
試劑二:50mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:6mL×1瓶,4℃保存。
植酸提?。?/p>
樣本烘干,粉碎過篩,稱取0.05g,加入1mL試劑一,震蕩提取2h;8000g,25℃離心10min,取上清0.5mL,加入0.5mL試劑二,混勻后4℃靜置2h,離心取上清待測。
測定步驟
1、酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至500nm。
2、測定管:取100μL上清,加入900μL試劑三,混勻后取150μL加入96孔板,再加入50μL試劑四,充分混勻后500nm下測定吸光值A1。
3、空白管:取100μL蒸餾水,加入900μL試劑三,混勻后取150μL加入96孔板,再加入50μL試劑四,充分混勻后500nm下測定吸光值A2。計算ΔA=A2-A1。
空白管只要做一管。
植酸含量計算:
標準狀態(tài)下的回歸曲線為:y = 2.0284x + 0.0096,R2 = 0.993;X為植酸鈉標準品濃度(mg/mL),y為吸光值ΔA(A2-A1)。
植酸含量(mg/g干重)=(ΔA-0.0096)÷ 2.0284×V反總÷V樣÷(W÷V樣總)
=9.86×(ΔA-0.0096)÷W
V反總:測定液總體積,1mL;V樣:加入反應體系中樣本體積,0.1mL; V樣總:加入提取液總體積,2mL;W:樣本干重,g。
注意事項:
若ΔA高于0.2,說明樣本植酸濃度過高,需要加蒸餾水適當稀釋,并在計算結果中乘以相應的稀釋倍數(shù)